qaz139687

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[求助] 各位用自己設(shè)計(jì)的引物PCR用的體系都是著么樣的呢已有3人參與

我的體系是  模板cDNA2ul
               上引物1ul
               下引物1ul
               Mg離子2.5ul
               dNTP0.5ul
               taq酶0.3ul
            dh2o17.7ul

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1樓 2014-10-26 10:04:11

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jackie.z

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qaz139687(西門(mén)吹雪170代發(fā)): 金幣+1, 鼓勵(lì)回帖交流 2014-10-29 09:03:29

體積沒(méi)有固定模板的，模板一般用100ng（多或少一點(diǎn)點(diǎn)影響不大），引物1ul的話濃度需要是10nmol，你這里用的酶和dNTP/Mg+都足夠了，其它影響不是太大

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7樓2014-10-28 00:17:36

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zhaodahe

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myprayer: 金幣+2, 贈(zèng)人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-10-26 18:08:27

咋沒(méi)BuFFEr？確定是這樣的嗎？

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2樓2014-10-26 16:07:39

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cnzpli

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3樓2014-10-26 18:52:38

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qaz139687

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3樓: Originally posted by cnzpli at 2014-10-26 18:52:38
2*mix10ul
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水補(bǔ)足20

你這是什么看不懂。。之前在一篇文章上看到是CDNA1ul Mg離子2ul dNTP1.6ul 上下引物各1ul Taq酶0.4ul 加水補(bǔ)到20ul 這些差一點(diǎn)的有什么影響嗎

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4樓2014-10-27 20:26:51

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cnzpli

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4樓: Originally posted by qaz139687 at 2014-10-27 20:26:51
你這是什么看不懂。。之前在一篇文章上看到是CDNA1ul Mg離子2ul dNTP1.6ul 上下引物各1ul Taq酶0.4ul 加水補(bǔ)到20ul 這些差一點(diǎn)的有什么影響嗎...

加多少不是看體積的不同濃度體積肯定不一樣引物是10nmol cdna是100ng 鎂離子和dntp按你說(shuō)的加

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5樓2014-10-27 20:56:55

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5樓: Originally posted by cnzpli at 2014-10-27 20:56:55
加多少不是看體積的不同濃度體積肯定不一樣引物是10nmol cdna是100ng 鎂離子和dntp按你說(shuō)的加
...

mmol 打錯(cuò)了

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6樓2014-10-27 20:58:07

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7樓: Originally posted by jackie.z at 2014-10-28 00:17:36
體積沒(méi)有固定模板的，模板一般用100ng（多或少一點(diǎn)點(diǎn)影響不大），引物1ul的話濃度需要是10nmol，你這里用的酶和dNTP/Mg+都足夠了，其它影響不是太大

模板100ng著么算的呀還有引物1ul需要10nmol

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8樓2014-10-28 15:42:51

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流氓一個(gè)

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20微升體系：
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dNTP 1
引物1 1
引物2 1
模板 1
酶 0.5

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我有我人生

9樓2014-10-30 15:20:44

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9樓: Originally posted by 流氓一個(gè) at 2014-10-30 15:20:44
20微升體系：
ddH2O 13.5
Buffer 2
dNTP 1
引物1 1
引物2 1
模板 1
酶 0.5

你做的是什么物種的我之前用這個(gè)體系跑了下發(fā)現(xiàn)跑出來(lái)的條帶非常弱

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10樓2014-10-31 12:25:35

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