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秦始皇faq鐵蟲 (初入文壇)
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克隆基因克隆不出來，請(qǐng)各位老師同學(xué)看看什么問題。 已有4人參與
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各位老師好，本人今年研一，做的是同源基因克隆。師兄從NCBI查找的序列，設(shè)計(jì)了12對(duì)引物（12個(gè)功能結(jié)構(gòu)域相似的基因），我用各種處理的（高溫，低溫，乙醇，鹽）CDNA模板跑pcr，一共只有4對(duì)引物跑出了條帶，但是大都與查找的序列不對(duì)應(yīng)，我使用的是諾唯贊的mix酶。 回收條帶后連接pud19-T載體，過夜培養(yǎng)后挑出單克隆，拿去測(cè)序，比對(duì)率都在25%左右。 不只是哪里出現(xiàn)了問題，跑PCR的時(shí)候就是按照師兄給的條件跑的：94 3min ;94 30s, 55 30s, 72 2min(30循環(huán));4 正無(wú)窮。 第一次發(fā)帖，也沒什么經(jīng)驗(yàn)，不知道說清楚沒有，金幣也沒多少，所以還請(qǐng)各位老師同學(xué)見諒，幫幫我！ |
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