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[求助]
克隆基因克隆不出來，請各位老師同學看看什么問題。 已有4人參與
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各位老師好，本人今年研一，做的是同源基因克隆。師兄從NCBI查找的序列，設計了12對引物（12個功能結(jié)構域相似的基因），我用各種處理的（高溫，低溫，乙醇，鹽）CDNA模板跑pcr，一共只有4對引物跑出了條帶，但是大都與查找的序列不對應，我使用的是諾唯贊的mix酶。 回收條帶后連接pud19-T載體，過夜培養(yǎng)后挑出單克隆，拿去測序，比對率都在25%左右。 不只是哪里出現(xiàn)了問題，跑PCR的時候就是按照師兄給的條件跑的：94 3min ;94 30s, 55 30s, 72 2min(30循環(huán));4 正無窮。 第一次發(fā)帖，也沒什么經(jīng)驗，不知道說清楚沒有，金幣也沒多少，所以還請各位老師同學見諒，幫幫我！ |
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5樓2014-11-24 20:28:46
zshw_001
金蟲 (小有名氣)
- 應助: 77 (初中生)
- 金幣: 506.4
- 帖子: 171
- 在線: 27.6小時
- 蟲號: 1151714
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- 專業(yè): 生物化學
2樓2014-11-24 17:00:24
3樓2014-11-24 17:40:10
4樓2014-11-24 20:24:37
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