 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 5 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 3977 | 回復(fù): 14 | |||
| 當(dāng)前只顯示滿足指定條件的回帖，點(diǎn)擊這里查看本話題的所有回帖 | |||
秦始皇faq鐵蟲 (初入文壇)
|
[求助]
克隆基因克隆不出來，請(qǐng)各位老師同學(xué)看看什么問題。 已有4人參與
|
||
|
各位老師好，本人今年研一，做的是同源基因克隆。師兄從NCBI查找的序列，設(shè)計(jì)了12對(duì)引物（12個(gè)功能結(jié)構(gòu)域相似的基因），我用各種處理的（高溫，低溫，乙醇，鹽）CDNA模板跑pcr，一共只有4對(duì)引物跑出了條帶，但是大都與查找的序列不對(duì)應(yīng)，我使用的是諾唯贊的mix酶。 回收條帶后連接pud19-T載體，過夜培養(yǎng)后挑出單克隆，拿去測(cè)序，比對(duì)率都在25%左右。 不只是哪里出現(xiàn)了問題，跑PCR的時(shí)候就是按照師兄給的條件跑的：94 3min ;94 30s, 55 30s, 72 2min(30循環(huán));4 正無窮。 第一次發(fā)帖，也沒什么經(jīng)驗(yàn)，不知道說清楚沒有，金幣也沒多少，所以還請(qǐng)各位老師同學(xué)見諒，幫幫我！ |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)中的趣事：實(shí)驗(yàn)器材的 “烏龍”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)中的趣事：和實(shí)驗(yàn)材料的 “斗智斗勇”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤(rùn)色/翻譯怎么收費(fèi)?
已經(jīng)有209人回復(fù)
-
蛋白質(zhì)檢測(cè)：精準(zhǔn)分析，解鎖生物分子的密碼
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之小鼠實(shí)驗(yàn)：嚴(yán)謹(jǐn)設(shè)計(jì)，解析生命機(jī)制的重要載體
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之重金屬檢測(cè)：精準(zhǔn)篩查，守護(hù)健康與環(huán)境的防線
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“蛙測(cè)重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標(biāo)南京
已經(jīng)有0人回復(fù)
» 本主題相關(guān)價(jià)值貼推薦，對(duì)您同樣有幫助:
- 克隆目的基因的問題
已經(jīng)有15人回復(fù)
- 一個(gè)基因做TA克隆后送去測(cè)序，不同的單克隆后來結(jié)果不一致，1500bp里有的11個(gè)堿基不同
已經(jīng)有9人回復(fù)
- 克隆基因?yàn)槭裁匆恢边B不到載體上
已經(jīng)有11人回復(fù)
- 求助分子克隆問題——挑不出陽性克隆！
已經(jīng)有14人回復(fù)
- T載體克隆做不出來，求幫助
已經(jīng)有24人回復(fù)
- 基因克隆失敗原因，求助！
已經(jīng)有10人回復(fù)
- 基因克隆轉(zhuǎn)化表達(dá)遇到問題，求大神解答
已經(jīng)有14人回復(fù)
- T-A克隆一直做不出來
已經(jīng)有28人回復(fù)
- 長(zhǎng)片段基因3.9K克隆不出來，求助
已經(jīng)有43人回復(fù)
- 克隆做不出來，求幫助
已經(jīng)有19人回復(fù)
- 已知基因序列，要用PCR克隆該基因，模板從哪里來？
已經(jīng)有13人回復(fù)
- 克隆基因，挑克隆拿去測(cè)序，好多點(diǎn)突怎么辦��？
已經(jīng)有21人回復(fù)
- 如何根據(jù)保守序列將基因片段克隆出來
已經(jīng)有16人回復(fù)
- 我有幾個(gè)克隆和基因重組的基本問題不太清楚，請(qǐng)各位幫幫忙！
已經(jīng)有6人回復(fù)
- 我做的基因克隆，平行的幾個(gè)克隆測(cè)序后，片段比對(duì)重疊率怎么不是100%
已經(jīng)有5人回復(fù)
- Ebook__《基因克隆和DNA分析》第四版中文版
已經(jīng)有422人回復(fù)
- 求助-基因克隆及引物設(shè)計(jì)的問題
已經(jīng)有6人回復(fù)
- 單個(gè)基因的克隆和表達(dá)可以發(fā)在什么雜志上
已經(jīng)有4人回復(fù)
- 克隆過程出現(xiàn)的問題
已經(jīng)有7人回復(fù)
- 基因克隆問題~~
已經(jīng)有5人回復(fù)
- 【求助/交流】基因做表達(dá)實(shí)驗(yàn)必須要克隆全長(zhǎng)嗎？
已經(jīng)有7人回復(fù)
- 【求助/交流】求助基因克隆方面的問題解決方案
已經(jīng)有17人回復(fù)
- 【求助/交流】已知基因序列如何克隆獲得
已經(jīng)有18人回復(fù)
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
秦始皇faq(西門吹雪170代發(fā)): 金幣+3, 鼓勵(lì)回帖交流 2014-11-25 13:16:46
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
秦始皇faq(西門吹雪170代發(fā)): 金幣+3, 鼓勵(lì)回帖交流 2014-11-25 13:16:46
| 測(cè)序結(jié)果比對(duì)不正確，估計(jì)是因?yàn)槟阋镌O(shè)計(jì)的不特異，沒有擴(kuò)增出你的目的基因；也可能是因?yàn)槟惚旧韽腘CBI上查找的序列就不正確，從而導(dǎo)致引物設(shè)計(jì)不正確。另外你其他的8個(gè)目的片段擴(kuò)增沒有條帶，建議你提高一下退火溫度。我之前用過諾唯贊的phanta mix酶，擴(kuò)增效率挺高的，不知道你用的是不是這個(gè)酶。如果你的GC含量高的話可以加入Enhance，能夠更好地?cái)U(kuò)增出目的片段。祝實(shí)驗(yàn)順利 |
6樓2014-11-25 09:29:27
zshw_001
金蟲 (小有名氣)
- 應(yīng)助: 77 (初中生)
- 金幣: 506.4
- 帖子: 171
- 在線: 27.6小時(shí)
- 蟲號(hào): 1151714
- 注冊(cè): 2010-11-20
- 性別: GG
- 專業(yè): 生物化學(xué)
2樓2014-11-24 17:00:24
3樓2014-11-24 17:40:10
秦始皇faq
鐵蟲 (初入文壇)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 1
- 帖子: 13
- 在線: 2.5小時(shí)
- 蟲號(hào): 3367823
- 注冊(cè): 2014-08-15
- 專業(yè): 作物分子育種
4樓2014-11-24 20:24:37
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 求調(diào)劑 +4 | Mqqqqqq 2026-03-19 | 4/200 |
|
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 一志愿中南化學(xué)337求調(diào)劑 +4 | niko- 2026-03-19 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 招收調(diào)劑碩士 +4 | lidianxing 2026-03-19 | 12/600 |
|
|
|
[考研] 085410人工智能專碩317求調(diào)劑（0854都可以） +4 | xbxudjdn 2026-03-18 | 4/200 |
|
|
|
[論文投稿]
申請(qǐng)回稿延期一個(gè)月，編輯同意了。但系統(tǒng)上的時(shí)間沒變，給編輯又寫郵件了，沒回復(fù)
 10+3
|
wangf9518 2026-03-17 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 材料學(xué)碩318求調(diào)劑 +5 | February_Feb 2026-03-19 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 一志愿武理材料305分求調(diào)劑 +5 | 想上岸的鯉魚 2026-03-18 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 295求調(diào)劑 +3 | 一志愿京區(qū)211 2026-03-18 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 一志愿西南交大，求調(diào)劑 +4 | 材化逐夢(mèng)人 2026-03-18 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 收復(fù)試調(diào)劑生 +4 | 雨后秋荷 2026-03-18 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 0703化學(xué)336分求調(diào)劑 +6 | zbzihdhd 2026-03-15 | 7/350 |
|
|
|
[碩博家園] 湖北工業(yè)大學(xué) 生命科學(xué)與健康學(xué)院-課題組招收2026級(jí)食品/生物方向碩士 +3 | 1喜春8 2026-03-17 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 一志愿，福州大學(xué)材料專碩339分求調(diào)劑 +3 | 木子momo青爭(zhēng) 2026-03-15 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 283求調(diào)劑 +3 | 聽風(fēng)就是雨； 2026-03-16 | 3/150 |
|
|
|
[基金申請(qǐng)]
今年的國(guó)基金是打分制嗎？
50+3
|
zhanghaozhu 2026-03-14 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 304求調(diào)劑 +5 | 素年祭語 2026-03-15 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 中科院材料273求調(diào)劑 +4 | yzydy 2026-03-15 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 080500，材料學(xué)碩302分求調(diào)劑學(xué)校 +4 | 初識(shí)可樂 2026-03-14 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 本科南京大學(xué)一志愿川大藥學(xué)327 +3 | 麥田耕者 2026-03-14 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 297一志愿上交085600求調(diào)劑 +5 | 指尖八千里 2026-03-14 | 5/250 |
|