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HSY郡主新蟲 (初入文壇)
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[求助]
目的基因和表達(dá)載體連接不上，求指導(dǎo)！�。� 已有3人參與
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我的目的基因2.2k，送去公司直接合成的。合成后的目的基因連接在puc57載體上，質(zhì)粒大小為4.9k，其中目的基因2.2k，puc57載體本身2.7k。以質(zhì)粒為模板進(jìn)行pcr，膠回收目的片段，然后雙酶切（bamh1和ecor1）目的片段和表達(dá)載體pyes2（5.9k），連接，轉(zhuǎn)化。平板順利長菌了，菌落pcr結(jié)果為陽性，提質(zhì)粒酶切以后，卻驚奇的發(fā)現(xiàn)兩條帶的大小約為2.2k和2.7k�。。。≠|(zhì)粒竟然是最初的“目的基因+puc57載體”，而不是自己想要的“目的基因+pyes2載體”！��！全是假陽性，沒有我想要構(gòu)建的質(zhì)粒，why？！��！ 我明明已經(jīng)切膠回收了，按說不應(yīng)該污染這么多當(dāng)時(shí)pcr做模板的質(zhì)粒啊，新手上路，求大家指導(dǎo)！ |
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5樓2014-12-08 19:02:09
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