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wenzi6337木蟲(chóng) (著名寫(xiě)手)
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[求助]
求助關(guān)于his標(biāo)簽的ip 已有2人參與
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我準(zhǔn)備用表達(dá)的his融合蛋白釣取細(xì)胞裂解液中與之相互作用的蛋白， 設(shè)想是先將大腸桿菌中表達(dá)的蛋白用his-band純化， 再用純化的蛋白和細(xì)胞裂解液孵育， 用his的單抗掛孵育獲得的復(fù)合體蛋白， 再用蛋白A掛his的抗體（含his抗體，his融合蛋白和與之相互作用蛋白）， 最后用銀染分離蛋白， 打質(zhì)譜鑒定與我的his融合蛋白相互作用的蛋白。 請(qǐng)問(wèn)各位蟲(chóng)友我的設(shè)計(jì)是否可行？ 謝謝！ |
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【答案】應(yīng)助回帖
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搞這么麻煩，搭橋搭這么多，為啥不嘗試用Ni-NTA-瓊脂糖bead結(jié)合大腸桿菌中的his融合蛋白，然后加washing buffer清洗瓊脂糖bead，將bead加入到細(xì)胞裂解液例，孵育，然后再次washing，washing，washing，然后加入洗脫buffer，加loading buffer制樣跑PAGE？ 全程在一個(gè)EP管中操作，多簡(jiǎn)單啊。 |
2樓2015-01-17 11:22:15
wenzi6337
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3樓2015-01-17 13:41:49
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4樓2015-01-17 14:15:39
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