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天空的藍(lán)銅蟲 (小有名氣)
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[求助]
異硫氰酸胍提取DNA 已有4人參與
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| 剛開始做細(xì)菌分子實(shí)驗(yàn)，請(qǐng)問哪位大神能告訴我異硫氰酸胍與DNA、RNA的作用機(jī)理嗎？它作為提取DNA的藥劑有什么好壞呢？實(shí)在不懂，希望不吝賜教，謝謝~~~~ |
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mew10086
新蟲 (初入文壇)
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【答案】應(yīng)助回帖
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異硫氰酸胍-酚法提取RNA的原理：異硫氰酸胍和b-巰基乙醇共同作用抑制RNase的活性，同時(shí)異硫氰酸胍和十二烷基肌氨酸鈉共同作用是使蛋白質(zhì)變性，從而釋放RNA；在酸性條件下DNA極少發(fā)生解離，同蛋白質(zhì)一起變性被沉淀下來，而RNA溶于上清中。 異硫氰酸胍的毒性：吸入，攝入，皮膚接觸異硫氰酸胍均可造成損傷，所以操作時(shí)需穿好實(shí)驗(yàn)服，戴好手套和護(hù)目鏡；其與酸接觸可釋放極高毒性氣體，對(duì)水生生物有害，可能對(duì)水體環(huán)境產(chǎn)生長(zhǎng)期不良影響，因此應(yīng)避免釋放至環(huán)境中。 |
4樓2018-08-24 08:54:10
紅衛(wèi)大兵
木蟲 (正式寫手)
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- 專業(yè): 植物進(jìn)化生物學(xué)
【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
天空的藍(lán)(西門吹雪170代發(fā)): 金幣+3, 鼓勵(lì)熱心回帖交流 2015-01-24 20:46:48
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
天空的藍(lán)(西門吹雪170代發(fā)): 金幣+3, 鼓勵(lì)熱心回帖交流 2015-01-24 20:46:48
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1.異硫氰酸胍消化液 異硫氰酸胍4mol/L 檸檬酸鈉(PH7.0)25mmol/L 十二烷基肌酸鈉0.5% β-巰基乙醇0.1mol/L 2.消化方法：用50～100ul細(xì)胞懸液及血清，加等體積的異硫氰酸胍消化液振混勻后，或65℃1小時(shí)，或室溫放置數(shù)分鐘，然后加1/10體積的3mmol/LpH5.2的醋酸鈉緩沖液，再加等體積的酚：氯仿，用力振搖約10s，10000r/min，離心5min，取上清加等體積異丙醇-20℃放置3h后，14000r/min離心15min，沉定用75%冰冷乙醇離心洗滌1～2次，真空干燥，沉淀用TE緩沖液溶解即可用于逆轉(zhuǎn)錄PCR擴(kuò)增，或放-20℃保存。 |
2樓2015-01-24 18:44:59
碧雪凡
銅蟲 (初入文壇)
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3樓2015-08-21 13:18:27
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