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bolomeer

銅蟲(chóng) (小有名氣)

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[交流] DNA提取過(guò)程中的RNA消化

大家好，大家在需要避免RNA干擾的DNA提取過(guò)程中通常有多大濃度的RNase A，處理?xiàng)l件和時(shí)間是怎樣的？我通常用2.5ng/ul的濃度，37度處理1小時(shí)，有時(shí)去不干凈，影響下游檢測(cè)，但是時(shí)間長(zhǎng)了又怕把DNA也降解掉，請(qǐng)問(wèn)有沒(méi)有更好的條件。

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1樓 2013-06-22 11:01:55

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cicelyzh

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★
bolomeer(金幣+1): 謝謝參與
1949stone: 回帖置頂 2013-06-24 08:07:59

RNase的用量取決于樣品量的多少，我一般情況下~0.5 μg/μg DNA。用的是DNase-free的RNase，應(yīng)該不會(huì)把DNA降解的。而且一般情況下DNA比RNA要穩(wěn)定，不加入DNase的話DNA不會(huì)那么容易被降解掉的。

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3樓2013-06-22 17:20:24

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dcb005

金蟲(chóng) (著名寫(xiě)手)

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bolomeer(金幣+1): 謝謝參與
myprayer: 金幣+1, Gifts of roses, hand there are lingering fragrance. Look forward to your wonderful and more detailed answer. 2013-06-22 16:52:59

10 mg/ml，加入4ul 到一個(gè)1.5ml tube里，也就是一個(gè)反應(yīng)體系用4ul

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2樓2013-06-22 12:00:59

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Science298

銅蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)

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bolomeer(金幣+1): 謝謝參與
1949stone: sure嗎？？？ 2013-06-24 08:08:22

對(duì)著每個(gè)管子哈口氣就足夠了。

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4樓2013-06-23 19:37:08

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Science298

銅蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)

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如果樓主提取RNA是做分子標(biāo)記或者芯片的話，沒(méi)有必要在意RNA殘留，要曉得RNAase無(wú)處不再且超級(jí)難以滅火（有興趣的可以去嘗試提取一下RNA），所以個(gè)人且以為正常呼吸就足夠了。

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5樓2013-06-24 08:41:45

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