【答案】應助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
sxjcas: 金幣+10, ★★★很有幫助 2015-02-15 19:56:17

蛋白保存應根據(jù)對活性的要求及蛋白的種類而定：抗體:除非一些公司特別要求-20℃凍存，一般4℃可穩(wěn)定一年（無菌，如加疊氮鈉），因為抗體是一種具有非常穩(wěn)定結構的蛋白；要求具有活性的蛋白,最好根據(jù)需要小量保存4℃(一周）、-20℃(一個月)、-80℃(六個月)、液氮（基本無限期），反復凍融會導致諸多不良后果，如聚集、修飾、降解、污染等（取決于蛋白濃度、緩沖液成分及蛋白本身的特點）；凍干是一種很好的長期保存法（如條件具備），在大多數(shù)情況下可以很好地保存蛋白的活性，但不適于某些蛋白（因有些蛋白對凍干重溶時必然產(chǎn)生的鹽離子濃度的急劇變化反應不佳，其活性會永久喪失（應具體對待，尚無規(guī)律可循）。另：蛋白聚集與二硫鍵形成是兩個概念，巰基乙醇只負責維持-SH的游離狀態(tài)，形成二硫鍵是一化學反應，產(chǎn)生純凈物，聚集一般只通過一些離子鍵、范德華力、疏水力形成，可以用物理方法分開。較長時間的保存最好用DTT。在加入緩沖液中24小時內(nèi)，巰基乙醇被氧化，其后可加速蛋白的失活，而DTT不危及蛋白質的巰基。因此，最好是在制備蛋白質樣品的時候用大約12mmol/L巰基乙醇，而長期儲存則使用1-5mmol/L的DTT。（見《蛋白質技術手冊》）另外，我有印象看產(chǎn)品目錄的時候，看到有一種用于western的試劑盒，提供的試劑可以在還原二硫鍵之后在巰基上烷基化，這樣就防止了二硫鍵的再次生成。抗體儲存容器應由不吸附蛋白質的材料制成，常用的有聚丙烯，聚碳酸酯和硼硅酸玻璃。如儲存的抗體中蛋白濃度很低（10-100Mg/L），就應另加隔離蛋白以減少容器對抗體蛋白的吸附，隔離蛋白常用0.1%-1.0%的牛血清白蛋白。絕大多數(shù)已稀釋的抗體應存在4℃-8℃條件下，以免凍融對抗體蛋白產(chǎn)生有害效應。抗體原液和已分離的免疫球蛋白組分應保存于-20℃條件下，并避免反復凍融。冷凍的抗體溶液應置于室溫中緩慢地解凍，應絕對避免用高溫快速解凍。被細菌污染的抗體常會出現(xiàn)假陽性結果，應將污染的抗體溶液及其他試劑

棄之。為防止細菌污染，可于抗體溶液中加入0.01%疊氮鈉。抗體經(jīng)真空冷凍干燥后置-20℃以下可保存3-5年。保存稀釋后的單抗應加入0.1%疊氮鈉濃度。大多數(shù)稀釋抗體可進行冷凍保存，少數(shù)抗體可能會丟失抗原活性。大多數(shù)單抗，只要蛋白濃度適當，可在4℃下保存數(shù)月。其他注意事項：分裝可以最大程度的降低反復凍融對抗體活性的損害，同時也降低了由于多次從同一管中吸取抗體造成的污染可能性。分裝的量以一次實驗用完為好，最少不能少于10ul每份。因為分裝體積越小，抗體的濃度越可能會受到蒸發(fā)以及管壁吸附的影響。復融后的分裝抗體如果一次用不完，將剩余母液保存在4℃，避免再凍起來！抗體工作液應該當天配制當天用完，在4℃ 盡量不要超過1天。絕對避免將抗體保存在自動除霜冰箱中。盡量將抗體保存在冰箱里層，而不是門上。無論是保存還是運輸，絕對避免反復凍融！反復凍融會導致抗體變性，導致多聚體形成，從而降低抗體的結合能力！蛋白在高濃度時更不容易降解（1 mg/ml 或者更高），這就是為什么在抗體中加入BSA之類作為穩(wěn)定劑的原因了；另一方面，加入的蛋白也可以減少抗體由于管壁吸附所造成的損失。但是如果抗體要用來標記的話，則不能加入蛋白穩(wěn)定劑，因為這些穩(wěn)定劑會和抗體一起競爭結合標記物。為了防止微生物污染，疊氮化鈉經(jīng)常被加入到抗體中（終濃度0.02% (w/v)）。疊氮化鈉會干擾任何含有氨基基團的偶聯(lián)，因此在進行偶聯(lián)之前，應將疊氮化鈉去除。偶聯(lián)后的抗體可以加入疊氮化鈉保存，但是濃度只能是0.01％。對于需要偶聯(lián)的抗體，thimerosal (merthiolate)可以替代疊氮化鈉作為保護劑！注：疊氮化鈉的去除方式：可以通過凝膠電泳或過濾的方式去除！IgG的分子量是150kDa (IgM 是~ 600kDa); 疊氮化鈉的分子量只有65Da。使用cut off 14kDa的濾膜即可將疊氮化鈉從抗體中去除。純化IgG: 不要保存稀釋的抗體,高濃度有利于保存。IgG會粘附于玻璃或塑料，低于0.1mg/ml的蛋白會很快被吸收并變性失去活性。

贊一下(1人)

回復此樓

2樓2015-02-15 10:07:19

已閱關注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

sxjcas

禁蟲 (知名作家)

本帖內(nèi)容被屏蔽

3樓2015-02-15 19:36:51

已閱關注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

最具人氣熱帖推薦 [查看全部]	作者	回/看	最后發(fā)表

[考研] 081700化工學碩調劑 +3	【1】 2026-03-16	3/150	2026-03-19 23:40 by edmund7
[考研] 288求調劑 +15	于海海海海 2026-03-19	15/750	2026-03-19 22:41 by 學員8dgXkO
[考研] 一志愿武漢理工材料工程專碩調劑 +5	Doleres 2026-03-19	5/250	2026-03-19 20:14 by 制度的
[考研] 【考研調劑】化學專業(yè) 281分，一志愿四川大學，誠心求調劑 +5	吃吃吃才有意義 2026-03-19	5/250	2026-03-19 16:18 by 30660438
[考研] 274求調劑 +6	S.H1 2026-03-18	6/300	2026-03-19 09:34 by 花店相見
[考研] 085410人工智能專碩317求調劑（0854都可以） +3	xbxudjdn 2026-03-18	3/150	2026-03-18 22:14 by zhq0425
[考研] 328求調劑，英語六級551，有科研經(jīng)歷 +3	生物工程調劑 2026-03-17	7/350	2026-03-18 20:41 by Wangjingyue
[考研] 材料專業(yè)求調劑 +5	hanamiko 2026-03-18	5/250	2026-03-18 20:19 by 星空星月
[考研] 化學工程321分求調劑 +15	大米飯！ 2026-03-15	18/900	2026-03-18 14:52 by haxia
[考研] 268求調劑 +8	一定有學上- 2026-03-14	9/450	2026-03-17 17:47 by laoshidan
[考研] 材料專碩326求調劑 +6	墨煜姒莘 2026-03-15	7/350	2026-03-17 17:10 by ruiyingmiao
[考研] 332求調劑 +6	Zz版 2026-03-13	6/300	2026-03-17 17:03 by ruiyingmiao
[考研] 283求調劑 +3	聽風就是雨； 2026-03-16	3/150	2026-03-17 07:41 by 熱情沙漠
[考研] 333求調劑 +3	文思客 2026-03-16	7/350	2026-03-16 18:21 by 文思客
[考研] 304求調劑 +5	素年祭語 2026-03-15	5/250	2026-03-16 17:00 by 我的船我的海
[考研] 一志愿211 0703方向310分求調劑 +3	努力奮斗112 2026-03-15	3/150	2026-03-16 16:44 by houyaoxu
[考研] 0703化學調劑 290分有科研經(jīng)歷，論文在投 +7	膩膩gk 2026-03-14	7/350	2026-03-16 10:12 by houyaoxu
[考研] 0856專碩279求調劑 +5	加油加油！? 2026-03-15	5/250	2026-03-15 11:58 by 2020015
[考研] 22408總分284求調劑 +3	InAspic 2026-03-13	3/150	2026-03-15 11:10 by zhq0425
[考研] 297求調劑 +4	學海漂泊 2026-03-13	4/200	2026-03-14 11:51 by 熱情沙漠