 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 8 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 4143 | 回復(fù): 7 | ||
lxyyzz木蟲(chóng) (小有名氣)
|
[求助]
菌液PCR無(wú)陽(yáng)性條帶求助！ 已有4人參與
|
|
RT，分子克隆鑒定的時(shí)候進(jìn)行菌液PCR，無(wú)陽(yáng)性條帶，后來(lái)陽(yáng)性對(duì)照實(shí)驗(yàn)如下： 1. 用原始質(zhì)粒DNA做模板進(jìn)行PCR，有條帶 2. 用原始質(zhì)粒的甘油菌做模板進(jìn)行PCR，無(wú)條帶！ 說(shuō)明整個(gè)菌液PCR過(guò)程有問(wèn)題，包含原始質(zhì)粒的菌液都無(wú)法出現(xiàn)陽(yáng)性條帶。 求助各位可能是哪方面的問(wèn)題？ （菌液PCR使用2X Taq mix， 使用程序第一步為熱變性，95度10分鐘和20分鐘兩個(gè)條件我都試過(guò)，但原始質(zhì)粒的菌液PCR都沒(méi)有條帶） |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)中的趣事：實(shí)驗(yàn)器材的 “烏龍”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)中的趣事：和實(shí)驗(yàn)材料的 “斗智斗勇”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤(rùn)色/翻譯怎么收費(fèi)?
已經(jīng)有184人回復(fù)
-
蛋白質(zhì)檢測(cè)：精準(zhǔn)分析，解鎖生物分子的密碼
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之小鼠實(shí)驗(yàn)：嚴(yán)謹(jǐn)設(shè)計(jì)，解析生命機(jī)制的重要載體
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之重金屬檢測(cè)：精準(zhǔn)篩查，守護(hù)健康與環(huán)境的防線
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“蛙測(cè)重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標(biāo)南京
已經(jīng)有0人回復(fù)
» 本主題相關(guān)商家推薦: (我也要在這里推廣)
» 本主題相關(guān)價(jià)值貼推薦，對(duì)您同樣有幫助:
- 菌液pcr,坐等求助
已經(jīng)有20人回復(fù)
- PCR片段連接載體，轉(zhuǎn)化不出陽(yáng)性克隆，求解?
已經(jīng)有14人回復(fù)
- 關(guān)于PCR連接后菌液鑒定的問(wèn)題
已經(jīng)有18人回復(fù)
- 載體構(gòu)建，測(cè)序結(jié)果顯示目的基因全突變，克隆入T載體，菌液PCR全是假陽(yáng)性
已經(jīng)有11人回復(fù)
- 菌液PCR出現(xiàn)問(wèn)題了
已經(jīng)有23人回復(fù)
- 各位大神，求助：PCR產(chǎn)物純化后沒(méi)有條帶了……
已經(jīng)有34人回復(fù)
- 菌落PCR有目的條帶，重組質(zhì)粒提取PCR卻沒(méi)條帶，請(qǐng)問(wèn)是什么原因？
已經(jīng)有13人回復(fù)
- 菌液PCR的假陽(yáng)性是什么原因造成的？
已經(jīng)有7人回復(fù)
- 大神救命！�。【篜CR 出來(lái)酶切質(zhì)粒沒(méi)有目的條帶
已經(jīng)有5人回復(fù)
- 菌液PCR英文怎么翻譯
已經(jīng)有4人回復(fù)
- real time PCR NTC 陽(yáng)性擴(kuò)增
已經(jīng)有5人回復(fù)
- 挑單克隆后，菌液PCR檢測(cè)所有條帶都偏小，目的條帶沒(méi)有出現(xiàn)
已經(jīng)有9人回復(fù)
- 轉(zhuǎn)化后菌液PCR鑒定，沒(méi)有目的條帶
已經(jīng)有15人回復(fù)
- 轉(zhuǎn)化后菌落pcr有目的條帶，小搖長(zhǎng)菌，再大搖不長(zhǎng)了，求幫助~
已經(jīng)有14人回復(fù)
- 菌液PCR出現(xiàn)雜帶是什么原因？
已經(jīng)有17人回復(fù)
- 菌液pcr出來(lái)后，質(zhì)粒提不出，測(cè)序老失��？
已經(jīng)有6人回復(fù)
- 菌液PCR沒(méi)東西，但是提完質(zhì)粒能跑出來(lái)?xiàng)l帶，為什么�。�
已經(jīng)有16人回復(fù)
- 菌落PCR無(wú)條帶
已經(jīng)有19人回復(fù)
- 菌液PCR是陽(yáng)性，卻提不出來(lái)陽(yáng)性質(zhì)粒！求助
已經(jīng)有31人回復(fù)
- 求幫忙分析下菌液PCR檢測(cè)結(jié)果
已經(jīng)有19人回復(fù)
- 【求助/交流】革蘭氏陽(yáng)性菌PCR問(wèn)題
已經(jīng)有7人回復(fù)
- 【求助/交流】PCR后沒(méi)有目的條帶，有非特異性條帶，求解決辦法？？
已經(jīng)有20人回復(fù)
- 【求助/交流】關(guān)于農(nóng)桿菌菌液PCR
已經(jīng)有13人回復(fù)
lxzk
木蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
- 應(yīng)助: 69 (初中生)
- 金幣: 2391.3
- 紅花: 4
- 帖子: 526
- 在線: 85.4小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 1210346
- 注冊(cè): 2011-02-23
- 專業(yè): 生物化學(xué)
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
lxyyzz: 金幣+2, ★有幫助, 我感覺(jué)是菌液的DNA沒(méi)有釋放出來(lái)，因?yàn)橛觅|(zhì)粒DNA做模板是可以做出條帶的啊 2015-03-31 09:37:08
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
lxyyzz: 金幣+2, ★有幫助, 我感覺(jué)是菌液的DNA沒(méi)有釋放出來(lái)，因?yàn)橛觅|(zhì)粒DNA做模板是可以做出條帶的啊 2015-03-31 09:37:08
|
第一，菌用量多了或者少了都會(huì)p不出來(lái)，第二，其實(shí)不用熱變性10分鐘，我一般做5分鐘，不過(guò)最好用熱啟動(dòng)酶，第三，換更高效的酶，如果可以的話我建議用kapa的2g robust hotstart mix，1k以下的片段從來(lái)沒(méi)有失敗過(guò) [ 發(fā)自手機(jī)版 http://www.gaoyang168.com/3g ] |
2樓2015-03-31 08:53:53
18761615793
木蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
小蟲(chóng)
- MolEPI: 1
- 應(yīng)助: 172 (高中生)
- 金幣: 646.4
- 散金: 170
- 紅花: 16
- 帖子: 863
- 在線: 144.9小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 3603131
- 注冊(cè): 2014-12-19
- 專業(yè): 抗體工程學(xué)
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
lxyyzz: 金幣+3, ★★★很有幫助, 1. 是普通的Taq聚合酶 2. 除了模板不同之外條件一摸一樣，是預(yù)混后分裝的 3. 無(wú)條帶的意思是目標(biāo)條帶、雜帶都沒(méi)有 2015-03-31 09:39:24
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
lxyyzz: 金幣+3, ★★★很有幫助, 1. 是普通的Taq聚合酶 2. 除了模板不同之外條件一摸一樣，是預(yù)混后分裝的 3. 無(wú)條帶的意思是目標(biāo)條帶、雜帶都沒(méi)有 2015-03-31 09:39:24
| 2乘Taq mix 是普通的Taq DNA聚合酶吧？？預(yù)變性盡然用95℃10-20min？一般的酶變性沒(méi)有這么長(zhǎng)時(shí)間啊，一般只有用化學(xué)修飾或者抗體修飾的的熱啟動(dòng)聚合酶才需要10min吧，你這有條帶和無(wú)條帶，除了模板不同之外其他反應(yīng)試劑條件都是一樣的嗎？無(wú)條帶是沒(méi)有目的條帶出來(lái)那有沒(méi)有雜帶呢，也沒(méi)說(shuō)啊 |
3樓2015-03-31 09:02:37
781055707
木蟲(chóng) (著名寫(xiě)手)
- 應(yīng)助: 291 (大學(xué)生)
- 金幣: 3118.2
- 散金: 46
- 紅花: 19
- 帖子: 2030
- 在線: 579.3小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 3046113
- 注冊(cè): 2014-03-13
- 性別: GG
- 專業(yè): 生物大分子結(jié)構(gòu)與功能
4樓2015-03-31 09:23:01
18761615793
木蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
小蟲(chóng)
- MolEPI: 1
- 應(yīng)助: 172 (高中生)
- 金幣: 646.4
- 散金: 170
- 紅花: 16
- 帖子: 863
- 在線: 144.9小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 3603131
- 注冊(cè): 2014-12-19
- 專業(yè): 抗體工程學(xué)
5樓2015-03-31 10:16:36
lxyyzz
木蟲(chóng) (小有名氣)
- 應(yīng)助: 1 (幼兒園)
- 金幣: 3587.6
- 散金: 14
- 帖子: 245
- 在線: 150.6小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 725367
- 注冊(cè): 2009-03-18
- 性別: GG
- 專業(yè): 細(xì)胞周期與調(diào)控
6樓2015-03-31 11:12:11
18761615793
木蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
小蟲(chóng)
- MolEPI: 1
- 應(yīng)助: 172 (高中生)
- 金幣: 646.4
- 散金: 170
- 紅花: 16
- 帖子: 863
- 在線: 144.9小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 3603131
- 注冊(cè): 2014-12-19
- 專業(yè): 抗體工程學(xué)
7樓2015-03-31 13:15:55
天——下
新蟲(chóng) (初入文壇)
- 應(yīng)助: 1 (幼兒園)
- 金幣: 438.8
- 帖子: 12
- 在線: 4.4小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 2422523
- 注冊(cè): 2013-04-17
- 專業(yè): 微生物遺傳育種學(xué)
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
lxyyzz: 金幣+3, ★有幫助, 1. 我的引物大概40bp左右，菌落PCR不能用長(zhǎng)引物是什么原理呢？與質(zhì)粒PCR有什么不同呢 2. 本來(lái)設(shè)計(jì)的煮樣10min是讓細(xì)菌裂解，使得DNA釋放出來(lái)作為模板 3. MIX使用的時(shí)候是稀釋為1X的才用的 2015-03-31 20:43:19
lxyyzz: 金幣+1, ★★★★★最佳答案, 確實(shí)是引物的問(wèn)題。我換了一個(gè)短一些的就P出來(lái)了，看來(lái)是菌液模板太復(fù)雜，引物特異性不行的結(jié)果。非常感謝！ 2015-04-01 14:16:47
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
lxyyzz: 金幣+3, ★有幫助, 1. 我的引物大概40bp左右，菌落PCR不能用長(zhǎng)引物是什么原理呢？與質(zhì)粒PCR有什么不同呢 2. 本來(lái)設(shè)計(jì)的煮樣10min是讓細(xì)菌裂解，使得DNA釋放出來(lái)作為模板 3. MIX使用的時(shí)候是稀釋為1X的才用的 2015-03-31 20:43:19
lxyyzz: 金幣+1, ★★★★★最佳答案, 確實(shí)是引物的問(wèn)題。我換了一個(gè)短一些的就P出來(lái)了，看來(lái)是菌液模板太復(fù)雜，引物特異性不行的結(jié)果。非常感謝！ 2015-04-01 14:16:47
| 你的引物長(zhǎng)度多少？菌落pcr不能用長(zhǎng)引物的；另外taq的話預(yù)變性5min足矣；mix用1*吧，干嘛用2*的呢？ |
8樓2015-03-31 17:14:26
相關(guān)版塊跳轉(zhuǎn)
我要訂閱樓主 lxyyzz 的主題更新
| 8 | 1/1 | 返回列表 |
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 一志愿西安交通大學(xué)材料工程專業(yè) 282分求調(diào)劑 +7 | 楓橋ZL 2026-03-18 | 9/450 |
|
|---|---|---|---|---|
|
|
[考研] 310求調(diào)劑 +3 | baibai1314 2026-03-16 | 3/150 |
|
|
[考研] 083200學(xué)碩321分一志愿暨南大學(xué)求調(diào)劑 +3 | innocenceF 2026-03-17 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 280求調(diào)劑 +7 | 咕嚕曉曉 2026-03-18 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 294求調(diào)劑材料與化工專碩 +15 | 陌の森林 2026-03-18 | 15/750 |
|
|
|
[考研] 一志愿蘇州大學(xué)材料求調(diào)劑，總分315（英一） +5 | sbdksD 2026-03-19 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑一志愿南京航空航天大學(xué)289分 +3 | @taotao 2026-03-19 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 353求調(diào)劑 +3 | 拉鉤不許變 2026-03-20 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 319求調(diào)劑 +3 | 小力氣珂珂 2026-03-20 | 3/150 |
|
|
|
[基金申請(qǐng)]
學(xué)校已經(jīng)提交到NSFC，還能修改嗎？
 40+4
|
babangida 2026-03-19 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 298-一志愿中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)-求調(diào)劑 +9 | 手機(jī)用戶 2026-03-17 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 085410人工智能專碩317求調(diào)劑（0854都可以） +4 | xbxudjdn 2026-03-18 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 0703化學(xué)調(diào)劑 +5 | pupcoco 2026-03-17 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 344求調(diào)劑 +6 | knight344 2026-03-16 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 311求調(diào)劑 +11 | 冬十三 2026-03-15 | 12/600 |
|
|
|
[考研] 308求調(diào)劑 +4 | 是Lupa啊 2026-03-16 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 085601求調(diào)劑 +4 | Du.11 2026-03-16 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 材料工程專碩274一志愿211求調(diào)劑 +6 | 薛云鵬 2026-03-15 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 26考研一志愿中國(guó)石油大學(xué)(華東)305分求調(diào)劑 +3 | 嘉年新程 2026-03-15 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 080500，材料學(xué)碩302分求調(diào)劑學(xué)校 +4 | 初識(shí)可樂(lè) 2026-03-14 | 5/250 |
|