 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 查看: 2331 | 回復(fù): 13 | ||
七小艾新蟲(chóng) (小有名氣)
|
[求助]
SDS-PAGE圖求分析 已有6人參與
|
|
|
圖中是放線(xiàn)菌菌體破碎上清的SDS-PAGE圖，樣品最終是用來(lái)跑雙向的，所以為了減少蛋白降解提高蛋白溶出率，用了不同的細(xì)胞裂解方法和幾種不同的裂解液，結(jié)果如圖所示。 A/B/C/D所用裂解液：Tris-HCl 50mM pH7.4, protease inhibitor cocktail E:Tris-HCl 50mM pH7.4, protease inhibitor cocktail, 8M 尿素 F：Tris-HCl 50mM pH7.4, protease inhibitor cocktail， 7M尿素，2M硫脲 G：Tris-HCl 50mM pH7.4, protease inhibitor cocktail，2%SDS（終濃度，SDS細(xì)胞破碎后加，65℃處理10min） 細(xì)胞破碎方法：A渦旋振蕩，B超聲，CDEFG機(jī)械均質(zhì) 想請(qǐng)教高手幾個(gè)問(wèn)題 1、用SDS處理后的樣品蛋白膠為什么會(huì)跑成這樣？上面大分子量的蛋白全沒(méi)了，下面糊成一片？做過(guò)不加SDS進(jìn)行65℃處理，雖然蛋白有一定程度降解，但大分子量的蛋白條帶還是有的，說(shuō)明不是高溫造成的結(jié)果。不知道樣品中過(guò)量的SDS對(duì)跑膠有沒(méi)有什么影響？ 2、尿素和硫脲對(duì)SDS-PAGE是不是也有影響？因?yàn)榧恿四蛩睾土螂宓臉悠返鞍啄z顏色反而不如不加的，但是蛋白濃度測(cè)定（Bradford法和BCA法都測(cè)過(guò)）結(jié)果顯示加了尿素和硫脲的蛋白濃度較高，是不是尿素和硫脲對(duì)Bradford法和BCA法都有干擾（硫脲對(duì)BCA有干擾是確定的）？ 3、蛋白膠每次跑出來(lái)下面小分子量部分都沒(méi)有清晰的條帶，而是糊成一片的，這是什么原因？ IMG_0578_副本.jpg |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
287求調(diào)劑
已經(jīng)有5人回復(fù)
-
22408 344分 求調(diào)劑 一志愿 華電計(jì)算機(jī)技術(shù)
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
289求調(diào)劑
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
317求調(diào)劑
已經(jīng)有10人回復(fù)
-
廣西大學(xué)家禽遺傳育種課題組2026年碩士招生（接收計(jì)算機(jī)專(zhuān)業(yè)調(diào)劑）
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
學(xué)校已經(jīng)提交到NSFC，還能修改嗎？
已經(jīng)有8人回復(fù)
-
08工學(xué)調(diào)劑
已經(jīng)有5人回復(fù)
-
281求調(diào)劑（0805）
已經(jīng)有25人回復(fù)
-
085600材料與化工
已經(jīng)有6人回復(fù)
-
265求調(diào)劑
已經(jīng)有8人回復(fù)
» 本主題相關(guān)商家推薦: (我也要在這里推廣)
» 本主題相關(guān)價(jià)值貼推薦，對(duì)您同樣有幫助:
- 怎么分析電泳膠圖
已經(jīng)有8人回復(fù)
- sds-page跑電泳Marker為什么只跑出四條帶
已經(jīng)有6人回復(fù)
- sds-page 凝膠電泳求助 只有marker條帶是清晰的，但寬窄不一
已經(jīng)有18人回復(fù)
- 怎么才能得到外文文獻(xiàn)中的SDS-PAGE 電泳圖片？？？
已經(jīng)有28人回復(fù)
- sds-page的實(shí)驗(yàn)?zāi)康�，�?shù)據(jù)分析？
已經(jīng)有3人回復(fù)
- 求助SDS-PAGE分析蛋白表達(dá)量（百分比含量）
已經(jīng)有6人回復(fù)
- Tricine-SDS-PAGE電泳結(jié)果分析，
已經(jīng)有15人回復(fù)
- 求MALDI TOF 質(zhì)譜專(zhuān)家?guī)兔Ψ治鱿伦V圖，萬(wàn)分感謝
已經(jīng)有5人回復(fù)
- 核酸電泳圖求分析
已經(jīng)有36人回復(fù)
- SDS-PAGE電泳圖這樣算成功嗎？
已經(jīng)有13人回復(fù)
- SDS-PAGE結(jié)果求分析原因
已經(jīng)有23人回復(fù)
- SDS-PAGE電泳圖條帶分析
已經(jīng)有19人回復(fù)
- SDS-PAGE電泳圖像與問(wèn)題分析
已經(jīng)有7人回復(fù)
- SDS-PAGE電泳樣品及MARKER跑不開(kāi)
已經(jīng)有6人回復(fù)
- 幫忙分析SDSPAGE問(wèn)題
已經(jīng)有5人回復(fù)
- SDS-PAGE凝膠電泳跑牛血紅蛋白
已經(jīng)有5人回復(fù)
- SDS-PAGE跑得很難看，請(qǐng)高手分析
已經(jīng)有11人回復(fù)
- SDS-PAGE定量分析
已經(jīng)有4人回復(fù)
- 請(qǐng)大家?guī)兔纯次业牡鞍纂娪緢D，謝謝大家了
已經(jīng)有10人回復(fù)
- 蛋白質(zhì)sds-page電泳圖分析
已經(jīng)有24人回復(fù)
- FTIR圖譜分析疑問(wèn)
已經(jīng)有9人回復(fù)
- 請(qǐng)大家?guī)兔Ψ治鱿挛业腟DS-PAGE蛋白檢測(cè)膠啊
已經(jīng)有26人回復(fù)
- 關(guān)于SDS-PAGE電泳問(wèn)題
已經(jīng)有12人回復(fù)
七小艾
新蟲(chóng) (小有名氣)
- 應(yīng)助: 1 (幼兒園)
- 金幣: 1727.6
- 帖子: 200
- 在線(xiàn): 70.6小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 1511345
- 注冊(cè): 2011-11-26
- 性別: MM
- 專(zhuān)業(yè): 蛋白質(zhì)組學(xué)
11樓2015-04-20 16:28:54
2樓2015-04-08 14:18:52
七小艾
新蟲(chóng) (小有名氣)
- 應(yīng)助: 1 (幼兒園)
- 金幣: 1727.6
- 帖子: 200
- 在線(xiàn): 70.6小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 1511345
- 注冊(cè): 2011-11-26
- 性別: MM
- 專(zhuān)業(yè): 蛋白質(zhì)組學(xué)
3樓2015-04-08 16:02:16
瓊瓊雨露
新蟲(chóng) (初入文壇)
- 應(yīng)助: 1 (幼兒園)
- 金幣: 2
- 帖子: 3
- 在線(xiàn): 2.5小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 3530909
- 注冊(cè): 2014-11-11
- 專(zhuān)業(yè): 生物信息學(xué)
4樓2015-04-08 19:20:50
七小艾
新蟲(chóng) (小有名氣)
- 應(yīng)助: 1 (幼兒園)
- 金幣: 1727.6
- 帖子: 200
- 在線(xiàn): 70.6小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 1511345
- 注冊(cè): 2011-11-26
- 性別: MM
- 專(zhuān)業(yè): 蛋白質(zhì)組學(xué)
5樓2015-04-08 19:28:51
6樓2015-04-09 10:23:58
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
七小艾: 金幣+2, ★有幫助 2015-04-20 16:30:24
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
七小艾: 金幣+2, ★有幫助 2015-04-20 16:30:24
| 首先，65℃不會(huì)造成這種現(xiàn)象。因?yàn)楹芏郔P洗脫最后都是用95煮沸洗脫的。所以排除高溫影響；其次，你再跑一次，并把marker加上，如果marker也這樣說(shuō)明是你的制膠有問(wèn)題。很有可能是濃縮膠不合適；如果濃縮膠能把你的溴酚藍(lán)壓成一條線(xiàn)，那就有可能是分離膠的出了問(wèn)題。你檢查一下你的溶液是不是渾濁、有絮狀物質(zhì)或者是弄錯(cuò)了PH值。 |
7樓2015-04-09 11:41:32
huangdan1003
新蟲(chóng) (初入文壇)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 28.9
- 散金: 10
- 帖子: 31
- 在線(xiàn): 19.5小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 1568360
- 注冊(cè): 2012-01-07
- 專(zhuān)業(yè): 蛋白質(zhì)組學(xué)
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★ ★ ★
七小艾: 金幣+5, ★★★很有幫助 2015-04-20 16:29:06
七小艾: 金幣+5, ★★★很有幫助 2015-04-20 16:29:06
|
1。樣品中過(guò)量的SDS會(huì)使蛋白分子帶負(fù)電荷，電泳速度可想而知~~，另外處理二維電泳蛋白樣品不需要加SDS。推薦裂解液：8M 尿素, 4% CHAPS, 1%IPG buffer, protease inhibitor cocktail 2.做一維的蛋白電泳樣品預(yù)處理的時(shí)候需要高溫水煮變性，尿素和硫脲會(huì)在高溫時(shí)候轉(zhuǎn)化成尿酸，但是不影響在二維電泳時(shí)候的效果。 3.一般二維電泳蛋白樣品都是全蛋白電泳，而細(xì)胞中本來(lái)小分子蛋白就很多，再加上還有部分大分子蛋白降解成小分子，模糊成一片很正常。其實(shí)不推薦用這種方法來(lái)做二維的預(yù)實(shí)驗(yàn)。。。二維電泳蛋白樣品處理最怕的就是離子的干擾，把這個(gè)問(wèn)題解決了，一般問(wèn)題不大。。 |
8樓2015-04-12 14:53:25
七小艾
新蟲(chóng) (小有名氣)
- 應(yīng)助: 1 (幼兒園)
- 金幣: 1727.6
- 帖子: 200
- 在線(xiàn): 70.6小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 1511345
- 注冊(cè): 2011-11-26
- 性別: MM
- 專(zhuān)業(yè): 蛋白質(zhì)組學(xué)
9樓2015-04-20 16:23:07
七小艾
新蟲(chóng) (小有名氣)
- 應(yīng)助: 1 (幼兒園)
- 金幣: 1727.6
- 帖子: 200
- 在線(xiàn): 70.6小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 1511345
- 注冊(cè): 2011-11-26
- 性別: MM
- 專(zhuān)業(yè): 蛋白質(zhì)組學(xué)
10樓2015-04-20 16:25:56
相關(guān)版塊跳轉(zhuǎn)
我要訂閱樓主 七小艾 的主題更新
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 工科材料085601 279求調(diào)劑 +6 | 困于星晨 2026-03-17 | 8/400 |
|
|---|---|---|---|---|
|
|
[考研] 一志愿中國(guó)海洋大學(xué)，生物學(xué)，301分，求調(diào)劑 +5 | 1孫悟空 2026-03-17 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 一志愿蘇州大學(xué)材料求調(diào)劑，總分315（英一） +3 | sbdksD 2026-03-19 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 生物學(xué)調(diào)劑招人�。�！ +3 | 山海天嵐 2026-03-17 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 一志愿天大材料與化工（085600）總分338 +5 | 蔡大美女 2026-03-13 | 5/250 |
|
|
[考研] 一志愿985，本科211，0817化學(xué)工程與技術(shù)319求調(diào)劑 +10 | Liwangman 2026-03-15 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 330求調(diào)劑 +3 | 小材化本科 2026-03-18 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 0703化學(xué)336分求調(diào)劑 +6 | zbzihdhd 2026-03-15 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 277調(diào)劑 +5 | 自由煎餅果子 2026-03-16 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 275求調(diào)劑 +4 | 太陽(yáng)花天天開(kāi)心 2026-03-16 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 302求調(diào)劑 +4 | 小賈同學(xué)123 2026-03-15 | 8/400 |
|
|
|
[論文投稿] 有沒(méi)有大佬發(fā)小論文能帶我個(gè)二作 +3 | 增銳漏人 2026-03-17 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 機(jī)械專(zhuān)碩325，尋找調(diào)劑院校 +3 | y9999 2026-03-15 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 333求調(diào)劑 +3 | 文思客 2026-03-16 | 7/350 |
|
|
|
[基金申請(qǐng)]
今年的國(guó)基金是打分制嗎？
 50+3
|
zhanghaozhu 2026-03-14 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 318求調(diào)劑 +3 | Yanyali 2026-03-15 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 0703 物理化學(xué)調(diào)劑 +3 | 我可以上岸的對(duì)?/a> 2026-03-13 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 一志愿哈工大材料324分求調(diào)劑 +5 | 閆旭東 2026-03-14 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 招收0805（材料）調(diào)劑 +3 | 18595523086 2026-03-13 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 311求調(diào)劑 +3 | 冬十三 2026-03-13 | 3/150 |
|