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七小艾新蟲 (小有名氣)
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[求助]
SDS-PAGE圖求分析 已有6人參與
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圖中是放線菌菌體破碎上清的SDS-PAGE圖，樣品最終是用來跑雙向的，所以為了減少蛋白降解提高蛋白溶出率，用了不同的細(xì)胞裂解方法和幾種不同的裂解液，結(jié)果如圖所示。 A/B/C/D所用裂解液：Tris-HCl 50mM pH7.4, protease inhibitor cocktail E:Tris-HCl 50mM pH7.4, protease inhibitor cocktail, 8M 尿素 F：Tris-HCl 50mM pH7.4, protease inhibitor cocktail， 7M尿素，2M硫脲 G：Tris-HCl 50mM pH7.4, protease inhibitor cocktail，2%SDS（終濃度，SDS細(xì)胞破碎后加，65℃處理10min） 細(xì)胞破碎方法：A渦旋振蕩，B超聲，CDEFG機械均質(zhì) 想請教高手幾個問題 1、用SDS處理后的樣品蛋白膠為什么會跑成這樣？上面大分子量的蛋白全沒了，下面糊成一片？做過不加SDS進(jìn)行65℃處理，雖然蛋白有一定程度降解，但大分子量的蛋白條帶還是有的，說明不是高溫造成的結(jié)果。不知道樣品中過量的SDS對跑膠有沒有什么影響？ 2、尿素和硫脲對SDS-PAGE是不是也有影響？因為加了尿素和硫脲的樣品蛋白膠顏色反而不如不加的，但是蛋白濃度測定（Bradford法和BCA法都測過）結(jié)果顯示加了尿素和硫脲的蛋白濃度較高，是不是尿素和硫脲對Bradford法和BCA法都有干擾（硫脲對BCA有干擾是確定的）？ 3、蛋白膠每次跑出來下面小分子量部分都沒有清晰的條帶，而是糊成一片的，這是什么原因？ IMG_0578_副本.jpg |
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七小艾
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七小艾
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