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釀酒酵母

銅蟲 (初入文壇)

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[求助] 釀酒酵母HO基因的敲除

各位蟲友，請(qǐng)幫幫忙�。。。�！
本人做單倍體釀酒酵母HO基因的敲除試驗(yàn)。設(shè)計(jì)的目的長(zhǎng)片段引物為：HO-KO-F: AATCCATATCCTCATAAGCAGCAATCAATTCTATCTATACTTTAAACCAGCTGAAGCTTCGTACGC
HO-KO-R:
AATTTTACTTTTATTACATACAACTTTTTAAACTAATATACACATTATAGGCCACTAGTGGATCTG
其中每條引物的后20bp為擴(kuò)增PUG6上的kanmx基因引物。HO-KO-F前面的40多bp與HO基因的ATG前面的序列相同。HO-KO-R前面的40多bp與HO基因的TAA后面的相同。
我pcr擴(kuò)增出目的片段后轉(zhuǎn)入釀酒酵母中，用G418篩選。發(fā)現(xiàn)板上長(zhǎng)有菌落，但是挑單菌落培養(yǎng)pcr擴(kuò)增HO基因，發(fā)現(xiàn)有條帶。這是沒轉(zhuǎn)化成功嗎？請(qǐng)大家?guī)蛶兔�，有什么建議能給我分享一下。先謝謝大家了。

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一志愿武漢理工，總分321，英一數(shù)二，求老師收留。已經(jīng)有7人回復(fù)

1樓 2015-04-13 22:00:55

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