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小木蟲論壇-學術科研互動平臺 » 生物醫(yī)藥區(qū) » 分子生物 » 綜合其他 » 有高手了解文庫構建嗎？
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玲瓏琉璃銅蟲 (正式寫手)
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有高手了解文庫構建嗎？ 已有1人參與
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需要構建的是基因組文庫，有問題想請教一下。 目前想到的是，1. 構建文庫需要的基因組含量，大概需要多少ng？ 2. 具體操作中，基因組片段要和載體相連接，文科構建的連接和一般構建的連接一樣嗎？一般的連接體系是10ul，分別加片段、載體、buffer和酶。構建文庫時體積需要擴大多少倍呢？ 3. 評價效價時要計算文庫滴度和獲得的克隆數，這部分沒大看懂。這兩個是否是一個意思，根據文庫滴度來推算獲得的總的克隆數，而不是一個一個得去計數單克隆。而且實驗方法中經常提到做梯度稀釋，這個不大明白，一般的文庫構建不需要稀釋的。構建文庫涂板時都需要稀釋才能涂板還是每個每個稀釋的濃度分別涂板。 希望熱心的高手能解答一下，先謝謝啦！ |
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2樓2015-04-30 09:24:22
玲瓏琉璃
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4樓2015-05-01 23:41:28
Longnil
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玲瓏琉璃: 金幣+50, ★★★★★最佳答案, 清晰！謝謝！ 2015-06-15 09:17:09
玲瓏琉璃: 金幣+50, ★★★★★最佳答案, 清晰！謝謝！ 2015-06-15 09:17:09
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樓主你好，我現(xiàn)在也在建庫 1. 構建文庫需要的基因組含量，需要80ng 2. 基因組酶切后與載體進行連接（20微升體系）： 15.5微升DNA、2微升buffer、1.5微升PUC118 3.這一步我們是預先涂兩個濃度的平板2微升和20微升，37℃培養(yǎng)12小時后根據平板上菌的生長量來確定具體涂布多少轉化液。(每個板100-200個菌最適) 有什么問題或好的想法希望我們繼續(xù)交流，祝你好運！ |
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玲瓏琉璃5樓2015-05-08 09:46:23
玲瓏琉璃
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6樓2015-06-15 09:24:18
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7樓2015-06-25 19:02:13
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