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玲瓏琉璃銅蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
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[求助]
有高手了解文庫(kù)構(gòu)建嗎？ 已有1人參與
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需要構(gòu)建的是基因組文庫(kù)，有問(wèn)題想請(qǐng)教一下。 目前想到的是，1. 構(gòu)建文庫(kù)需要的基因組含量，大概需要多少ng？ 2. 具體操作中，基因組片段要和載體相連接，文科構(gòu)建的連接和一般構(gòu)建的連接一樣嗎？一般的連接體系是10ul，分別加片段、載體、buffer和酶。構(gòu)建文庫(kù)時(shí)體積需要擴(kuò)大多少倍呢？ 3. 評(píng)價(jià)效價(jià)時(shí)要計(jì)算文庫(kù)滴度和獲得的克隆數(shù)，這部分沒(méi)大看懂。這兩個(gè)是否是一個(gè)意思，根據(jù)文庫(kù)滴度來(lái)推算獲得的總的克隆數(shù)，而不是一個(gè)一個(gè)得去計(jì)數(shù)單克隆。而且實(shí)驗(yàn)方法中經(jīng)常提到做梯度稀釋，這個(gè)不大明白，一般的文庫(kù)構(gòu)建不需要稀釋的。構(gòu)建文庫(kù)涂板時(shí)都需要稀釋才能涂板還是每個(gè)每個(gè)稀釋的濃度分別涂板。 希望熱心的高手能解答一下，先謝謝啦！ |
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玲瓏琉璃
銅蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
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3樓2015-05-01 11:16:48
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Longnil
新蟲(chóng) (小有名氣)
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【答案】應(yīng)助回帖
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玲瓏琉璃: 金幣+50, ★★★★★最佳答案, 清晰！謝謝！ 2015-06-15 09:17:09
玲瓏琉璃: 金幣+50, ★★★★★最佳答案, 清晰！謝謝！ 2015-06-15 09:17:09
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樓主你好，我現(xiàn)在也在建庫(kù) 1. 構(gòu)建文庫(kù)需要的基因組含量，需要80ng 2. 基因組酶切后與載體進(jìn)行連接（20微升體系）： 15.5微升DNA、2微升buffer、1.5微升PUC118 3.這一步我們是預(yù)先涂?jī)蓚�(gè)濃度的平板2微升和20微升，37℃培養(yǎng)12小時(shí)后根據(jù)平板上菌的生長(zhǎng)量來(lái)確定具體涂布多少轉(zhuǎn)化液。(每個(gè)板100-200個(gè)菌最適) 有什么問(wèn)題或好的想法希望我們繼續(xù)交流，祝你好運(yùn)！ |
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玲瓏琉璃5樓2015-05-08 09:46:23
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