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macmillian

新蟲 (初入文壇)

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專業(yè): 色譜分析

[求助] 細(xì)胞裂解液與酶解的兼容性

本人想做的實驗是將Hela細(xì)胞裂解提取蛋白后，還原烷基化胰酶酶解，最后SPE純化后用LC-MS/MS分析。我們實驗室剛好有人也在做細(xì)胞中蛋白的分析，他們使用的是RIPA強裂解液，里面的裂解成分主要是1% Triton X-100，1% 脫氧膽酸鈉和0.1% SDS。不過他們提出的蛋白后面都是先跑膠的，基本不用液質(zhì)分析或者也是跑完膠后再分析。
我的問題是這種RIPA裂解液適用于我的實驗嗎？不知道里面的表面活性劑成分會不會影響后續(xù)的酶解操作。我看文獻中做后續(xù)質(zhì)譜分析的大多用的含8 M尿素而不含表面活性劑的裂解液，是因為尿素也可以裂解細(xì)胞嗎？尿素稀釋到2 M以下就可以用Trypsin酶解，RIPA稀釋后可以嗎？
尿素裂解液里面的成分較多，不少試劑還得現(xiàn)買。RIPA實驗室有現(xiàn)成的，如果RIPA和后面的實驗不沖突還是希望能用RIPA做了。
第一次提問，希望大家能幫忙解惑。不勝感激。

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1樓 2015-05-03 10:30:27

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yq431

新蟲 (初入文壇)

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我們實驗室一般用8M尿素。不知道你們在上質(zhì)譜前是否脫鹽，RIPA能否在脫鹽步驟被除去我不清楚，如果不能被除去可能影響質(zhì)譜鑒定。

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回復(fù)此樓

2樓2018-02-06 11:08:56

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