 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 8 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 5836 | 回復(fù): 7 | ||||
Hzhenping新蟲 (小有名氣)
|
[求助]
求助Western Blot實(shí)驗(yàn)條帶沒出現(xiàn)的原因分析及解決辦法 已有4人參與
|
|
去年下半年做了一段時(shí)間WB實(shí)驗(yàn)，前田再次做，只換了個(gè)一抗和細(xì)胞裂解液，其他都沒變（當(dāng)然目的蛋白也不同了）。去年能出條帶，這次卻不能了。。。 現(xiàn)將改變的試劑及可疑操作羅列如下，供大神分析并搭救  1.細(xì)胞裂解液：RAPI細(xì)胞裂解液（強(qiáng)），碧云天生物技術(shù)研究所； 2.一抗:Isotype, IgG; Host, Rabbit; Species Reactivity, Human, Rat。 二抗：Goat Anti-Rabbit IgG. 3.目的蛋白大小約21KD，內(nèi)參用GAPDH，于27KD-18KD處剪膜。一抗用5%BSA1:1500稀釋，37oC孵育90min；二抗用5%BSA1:3000稀釋,37oC孵育90min。 4.DAB顯色試劑盒顯色。PVDF膜的熊樣如下：A 今天做了點(diǎn)蛋白試驗(yàn)（有叫“點(diǎn)雜交”），膜泡甲醇，晾干；蛋白樣品（4個(gè)）按20ug/10ul加2xLoading Buffer煮沸后點(diǎn)于膜上,干后封閉，孵一抗，二抗，顯色。PVDF膜熊樣如下：B、C。（白斑之間即為蛋白點(diǎn)樣點(diǎn)，由于膜被封閉液和5%BSA浸透而呈現(xiàn)這樣） A.jpg B.jpg C.jpg |
回復(fù)此樓» 收錄本帖的淘帖專輯推薦
 蛋白質(zhì)生物學(xué)實(shí)驗(yàn)經(jīng)驗(yàn) |
» 猜你喜歡
281求調(diào)劑（0805）
已經(jīng)有16人回復(fù)
-
304求調(diào)劑
已經(jīng)有6人回復(fù)
-
材料工程專碩調(diào)劑
已經(jīng)有6人回復(fù)
-
一志愿天大材料與化工（085600）總分338
已經(jīng)有4人回復(fù)
-
085700資源與環(huán)境308求調(diào)劑
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
求材料調(diào)劑
已經(jīng)有8人回復(fù)
-
294求調(diào)劑材料與化工專碩
已經(jīng)有5人回復(fù)
-
一志愿華中科技大學(xué)，080502，354分求調(diào)劑
已經(jīng)有4人回復(fù)
-
一志愿吉林大學(xué)材料學(xué)碩321求調(diào)劑
已經(jīng)有6人回復(fù)
-
085410人工智能專碩317求調(diào)劑（0854都可以）
已經(jīng)有3人回復(fù)
» 本主題相關(guān)商家推薦: (我也要在這里推廣)
» 本主題相關(guān)價(jià)值貼推薦，對您同樣有幫助:
- western blot出現(xiàn)多條帶是什么原因
已經(jīng)有8人回復(fù)
- western blot問題求助
已經(jīng)有9人回復(fù)
- western-blot的問題！��！
已經(jīng)有5人回復(fù)
- Western blot目的條帶顯影后怎么會(huì)這樣？？？看圖片
已經(jīng)有8人回復(fù)
- 這個(gè)western blot 圖是什么原因造成的？
已經(jīng)有4人回復(fù)
- western blot實(shí)驗(yàn)求助
已經(jīng)有5人回復(fù)
- Western Blot 目標(biāo)條帶跑不出來，內(nèi)參條帶清晰
已經(jīng)有13人回復(fù)
- western blot中古怪的非特異性條帶
已經(jīng)有9人回復(fù)
- westernblot 目標(biāo)蛋白無條帶
已經(jīng)有9人回復(fù)
- 求助western blot問題
已經(jīng)有8人回復(fù)
- western blot 顯色6組里邊只有一組有條帶，急，求助！謝謝！
已經(jīng)有4人回復(fù)
- Western Blot出現(xiàn)問題
已經(jīng)有19人回復(fù)
- western blot 第一次曝光有條帶，而且濃厚，第二次就沒有了。。。
已經(jīng)有13人回復(fù)
- western-blot實(shí)驗(yàn)結(jié)果，大家?guī)兔Ψ治鱿?/a>
已經(jīng)有7人回復(fù)
- Western Blot實(shí)驗(yàn)的蛋白條帶都連在一起
已經(jīng)有37人回復(fù)
- 求助western blot
已經(jīng)有5人回復(fù)
- western blot 求助，請高手指點(diǎn)一下
已經(jīng)有8人回復(fù)
- western blot時(shí)marker問題求助
已經(jīng)有18人回復(fù)
- 【求助/交流】western blot 缺帶 斷帶
已經(jīng)有21人回復(fù)
- 【求助/交流】western blot的內(nèi)參總是不齊怎么辦
已經(jīng)有19人回復(fù)
- 【求助】虛心向大家求教western blot
已經(jīng)有4人回復(fù)
- 【求助/交流】westernblot的背景怎么消除呀
已經(jīng)有10人回復(fù)
- 【求助/交流】western blot 一直都跑不出來，不知道原因，大俠給分析一下�。�？
已經(jīng)有13人回復(fù)
- 【求助/交流】請教Western blot出現(xiàn)非特異性條帶的怎么解決
已經(jīng)有8人回復(fù)
- 【求助/交流】western blot中的怪現(xiàn)象，求解~~~
已經(jīng)有19人回復(fù)
- 【求助】western blot條帶很淡是什么原因
已經(jīng)有6人回復(fù)
Hzhenping2樓2014-07-10 07:48:19
Hzhenping
新蟲 (小有名氣)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 634.8
- 帖子: 66
- 在線: 18.8小時(shí)
- 蟲號(hào): 2238877
- 注冊: 2013-01-13
- 性別: GG
- 專業(yè): 藥理學(xué)其他科學(xué)問題
3樓2014-07-10 09:13:16
liushuminlsm
新蟲 (初入文壇)
- 應(yīng)助: 2 (幼兒園)
- 金幣: 65.4
- 紅花: 2
- 帖子: 9
- 在線: 15.1小時(shí)
- 蟲號(hào): 1515706
- 注冊: 2011-11-29
- 專業(yè): 食品科學(xué)基礎(chǔ)
4樓2014-07-11 11:26:57
Hzhenping
新蟲 (小有名氣)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 634.8
- 帖子: 66
- 在線: 18.8小時(shí)
- 蟲號(hào): 2238877
- 注冊: 2013-01-13
- 性別: GG
- 專業(yè): 藥理學(xué)其他科學(xué)問題
5樓2014-07-11 19:59:32
凌波麗
專家顧問 (知名作家)
-
專家經(jīng)驗(yàn): +218 - BioEPI: 11
- 應(yīng)助: 397 (碩士)
- 貴賓: 0.044
- 金幣: 2118.9
- 散金: 10
- 紅花: 208
- 帖子: 5633
- 在線: 571.6小時(shí)
- 蟲號(hào): 1766465
- 注冊: 2012-04-19
- 性別: MM
- 專業(yè): 生物大分子結(jié)構(gòu)與功能
- 管轄: 生物科學(xué)綜合
【答案】應(yīng)助回帖
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
|
一、Western Blot實(shí)驗(yàn)條帶沒出現(xiàn)的原因分析及解決辦法 ： 原因分析 解決辦法 1.一抗和二抗失效 1. 更換抗體；選擇現(xiàn)用現(xiàn)配的工作液 2.一抗和二抗不匹配 2. 更換為同種同屬的同亞型的抗體底物 3.發(fā)光液失效 3. 更換新的發(fā)光液 4.抗體染色不充分 4. 增加抗體濃度；延長孵育時(shí)間 5.被測樣品中不含有目的蛋白質(zhì)或者目的 蛋白質(zhì)含量太低 5. 設(shè)置陽性對照。確定標(biāo)本中是否含有目的蛋白質(zhì)； 增加樣品 的上樣量。 6. 溶液中有辣根過氧化物酶的抑制劑 6.用透析和超濾除去所用溶液中如疊氮化鈉之類的抑制劑 7.抗體活力降低 7.在抗體活力保存時(shí)間內(nèi)使用抗體；工作液現(xiàn)用現(xiàn)配 二、WB出現(xiàn)白斑是因?yàn)檗D(zhuǎn)膜過程有氣泡存在；或者抗體的分布不均勻，孵育抗體時(shí)要使用搖床。 三、剪好的PVDF膜在使用前需要甲醇里泡1-2min，在零度的轉(zhuǎn)膜液中孵育3-5min。 意見僅供參考。 |
6樓2014-07-11 23:54:30
凌波麗
專家顧問 (知名作家)
-
專家經(jīng)驗(yàn): +218 - BioEPI: 11
- 應(yīng)助: 397 (碩士)
- 貴賓: 0.044
- 金幣: 2118.9
- 散金: 10
- 紅花: 208
- 帖子: 5633
- 在線: 571.6小時(shí)
- 蟲號(hào): 1766465
- 注冊: 2012-04-19
- 性別: MM
- 專業(yè): 生物大分子結(jié)構(gòu)與功能
- 管轄: 生物科學(xué)綜合
7樓2014-07-12 00:02:37
nrahouston
銅蟲 (初入文壇)
- 應(yīng)助: 5 (幼兒園)
- 金幣: 188.8
- 紅花: 1
- 帖子: 37
- 在線: 10小時(shí)
- 蟲號(hào): 3236445
- 注冊: 2014-05-27
- 專業(yè): 免疫生物學(xué)
8樓2014-07-12 06:57:26
相關(guān)版塊跳轉(zhuǎn)
我要訂閱樓主 Hzhenping 的主題更新
| 8 | 1/1 | 返回列表 |
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 一志愿中海洋材料工程專碩330分求調(diào)劑 +5 | 小材化本科 2026-03-18 | 5/250 |
|
|---|---|---|---|---|
|
|
[考研] 0703化學(xué)調(diào)劑，求各位老師收留 +9 | 秋有木北 2026-03-14 | 9/450 |
|
|
[考研] 266求調(diào)劑 +5 | 陽陽哇塞 2026-03-14 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 收復(fù)試調(diào)劑生 +4 | 雨后秋荷 2026-03-18 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 070300化學(xué)319求調(diào)劑 +6 | 錦鯉0909 2026-03-17 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 288求調(diào)劑，一志愿華南理工大學(xué)071005 +4 | ioodiiij 2026-03-17 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 生物學(xué)071000 329分求調(diào)劑 +3 | 我愛生物生物愛?/a> 2026-03-17 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 268求調(diào)劑 +7 | 好運(yùn)連綿不絕 2026-03-12 | 8/400 |
|
|
|
[碩博家園] 湖北工業(yè)大學(xué) 生命科學(xué)與健康學(xué)院-課題組招收2026級食品/生物方向碩士 +3 | 1喜春8 2026-03-17 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 考研化學(xué)學(xué)碩調(diào)劑，一志愿985 +4 | 張vvvv 2026-03-15 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 332求調(diào)劑 +6 | Zz版 2026-03-13 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 085600材料與化工求調(diào)劑 +5 | 緒幸與子 2026-03-17 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 一志愿南京大學(xué)，080500材料科學(xué)與工程，調(diào)劑 +4 | Jy? 2026-03-16 | 4/200 |
|
|
|
[考研]
 11408 一志愿西電，277分求調(diào)劑
+3
|
zhouzhen654 2026-03-16 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 中科院材料273求調(diào)劑 +4 | yzydy 2026-03-15 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 070305求調(diào)劑 +3 | mlpqaz03 2026-03-14 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 材料與化工 323 英一+數(shù)二+物化，一志愿：哈工大 本人本科雙一流 +4 | 自由的_飛翔 2026-03-13 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 289求調(diào)劑 +4 | 這么名字咋樣 2026-03-14 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 265求調(diào)劑 +4 | 威化餅07 2026-03-12 | 4/200 |
|
|
|
[考研] ［0860］321分求調(diào)劑，ab區(qū)皆可 +4 | 寶貴熱 2026-03-13 | 4/200 |
|