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Hzhenping新蟲(chóng) (小有名氣)
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[求助]
求助Western Blot實(shí)驗(yàn)條帶沒(méi)出現(xiàn)的原因分析及解決辦法 已有4人參與
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去年下半年做了一段時(shí)間WB實(shí)驗(yàn)，前田再次做，只換了個(gè)一抗和細(xì)胞裂解液，其他都沒(méi)變（當(dāng)然目的蛋白也不同了）。去年能出條帶，這次卻不能了。。。 現(xiàn)將改變的試劑及可疑操作羅列如下，供大神分析并搭救  1.細(xì)胞裂解液：RAPI細(xì)胞裂解液（強(qiáng)），碧云天生物技術(shù)研究所； 2.一抗:Isotype, IgG; Host, Rabbit; Species Reactivity, Human, Rat。 二抗：Goat Anti-Rabbit IgG. 3.目的蛋白大小約21KD，內(nèi)參用GAPDH，于27KD-18KD處剪膜。一抗用5%BSA1:1500稀釋，37oC孵育90min；二抗用5%BSA1:3000稀釋,37oC孵育90min。 4.DAB顯色試劑盒顯色。PVDF膜的熊樣如下：A 今天做了點(diǎn)蛋白試驗(yàn)（有叫“點(diǎn)雜交”），膜泡甲醇，晾干；蛋白樣品（4個(gè)）按20ug/10ul加2xLoading Buffer煮沸后點(diǎn)于膜上,干后封閉，孵一抗，二抗，顯色。PVDF膜熊樣如下：B、C。（白斑之間即為蛋白點(diǎn)樣點(diǎn)，由于膜被封閉液和5%BSA浸透而呈現(xiàn)這樣） A.jpg B.jpg C.jpg |
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 蛋白質(zhì)生物學(xué)實(shí)驗(yàn)經(jīng)驗(yàn) |
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