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細(xì)胞裂解液與酶解的兼容性
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本人想做的實(shí)驗(yàn)是將Hela細(xì)胞裂解提取蛋白后，還原烷基化胰酶酶解，最后SPE純化后用LC-MS/MS分析。我們實(shí)驗(yàn)室剛好有人也在做細(xì)胞中蛋白的分析，他們使用的是RIPA強(qiáng)裂解液，里面的裂解成分主要是1% Triton X-100，1% 脫氧膽酸鈉和0.1% SDS。不過他們提出的蛋白后面都是先跑膠的，基本不用液質(zhì)分析或者也是跑完膠后再分析。 我的問題是這種RIPA裂解液適用于我的實(shí)驗(yàn)嗎？不知道里面的表面活性劑成分會不會影響后續(xù)的酶解操作。我看文獻(xiàn)中做后續(xù)質(zhì)譜分析的大多用的含8 M尿素而不含表面活性劑的裂解液，是因?yàn)槟蛩匾部梢粤呀饧?xì)胞嗎？尿素稀釋到2 M以下就可以用Trypsin酶解，RIPA稀釋后可以嗎？ 尿素裂解液里面的成分較多，不少試劑還得現(xiàn)買。RIPA實(shí)驗(yàn)室有現(xiàn)成的，如果RIPA和后面的實(shí)驗(yàn)不沖突還是希望能用RIPA做了。 第一次提問，希望大家能幫忙解惑。不勝感激。 |
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2樓2018-02-06 11:08:56
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