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[求助]
RNA提取時(shí)，濃度4252.2，A260/280=1.99，但電泳跑不出RNA，原因是？ 已有10人參與
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我在提取RNA時(shí)，取樣0.1g，新鮮樣品現(xiàn)磨，用的Trizol提取法。結(jié)果RNA的濃度可以，2.0>A260/280>1.8，A260/230>2.0。但跑膠時(shí)沒(méi)有RNA出現(xiàn)，只有點(diǎn)樣孔很亮，和DNA Marker條帶（圖1）。跑膠時(shí)采用點(diǎn)樣體系：DNA Loading Buffer、DNA Marker、Gel stain（核酸染料）各2ul，上樣量2ul。跑膠條件：U=100V、I 隨意，時(shí)間12min。出現(xiàn)問(wèn)題之后，我采用大電泳槽電泳，電泳條件為：U=220V、I 隨意、時(shí)間15min。結(jié)果是RNA拖尾，DNA Marker更清楚（圖2）。請(qǐng)問(wèn)這種問(wèn)題可能是由于什么原因造成的？誰(shuí)有好主意接下來(lái)我該做些什么測(cè)試才能找出問(wèn)題和解決問(wèn)題？謝謝！ 圖1.jpg 圖2.jpg |
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luwei13566
木蟲 (正式寫手)
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【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
依然自然(西門吹雪170代發(fā)): 金幣+2, 鼓勵(lì)回帖交流 2015-05-15 19:34:31
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依然自然(西門吹雪170代發(fā)): 金幣+2, 鼓勵(lì)回帖交流 2015-05-15 19:34:31
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1.提取RNA的時(shí)候RNA的顏色有沒(méi)有變深？ 2.如果真是多糖多酚污染的話，聽說(shuō)有一種CTAB提植物RNA的方法，LZ可以去查一查。 3.其實(shí)可能最簡(jiǎn)便的解決方法就是把你現(xiàn)在提取樣品稀釋個(gè)100倍再跑個(gè)膠看看，你提的濃度那么大，隨便混雜點(diǎn)多酚沉淀就把你點(diǎn)樣孔給堵了，先先稀釋了跑一下看看能不能跑出孔，如果實(shí)在是你RNA全給結(jié)合了話只有試一試專門的試劑盒了！~你的提取方法是沒(méi)有問(wèn)題的 |
依然自然8樓2015-05-13 20:20:20
2樓2015-05-13 15:43:17
3樓2015-05-13 18:22:19
Neo2000
木蟲 (著名寫手)
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4樓2015-05-13 18:28:00
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