 |
 |
 |
| 24小時(shí)熱門(mén)版塊排行榜 |
- >論壇更新日志 (4755)
- >考研 (1735)
- >導(dǎo)師招生 (1318)
- >蟲(chóng)友互識(shí) (288)
- >文獻(xiàn)求助 (228)
- >碩博家園 (135)
- >休閑灌水 (128)
- >考博 (73)
- >招聘信息布告欄 (66)
- >基金申請(qǐng) (64)
- >博后之家 (47)
- >綠色求助(高懸賞) (35)
- >論文投稿 (30)
- >材料綜合 (23)
- >攻關(guān)文獻(xiàn)(高獎(jiǎng)勵(lì)) (13)
- >金屬 (12)
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 5 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 2418 | 回復(fù): 8 | |||
| 當(dāng)前只顯示滿足指定條件的回帖，點(diǎn)擊這里查看本話題的所有回帖 | |||
緣來(lái)是伊木蟲(chóng) (小有名氣)
|
[交流]
誰(shuí)有做電轉(zhuǎn)化時(shí)E.coli感受態(tài)細(xì)胞的制備的操作步驟的資料？求分享，謝謝！
|
||
| 由于電轉(zhuǎn)化效率比較高，我的質(zhì)粒比較大，想用電轉(zhuǎn)化，誰(shuí)有做電轉(zhuǎn)化時(shí)E.coli感受態(tài)細(xì)胞的制備的操作步驟的資料？求分享，謝謝！ |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
275學(xué)碩081000服從調(diào)劑到其他專業(yè)，保不住本專業(yè)了
已經(jīng)有8人回復(fù)
-
085600，320分求調(diào)劑
已經(jīng)有4人回復(fù)
-
071000生物學(xué)調(diào)劑
已經(jīng)有4人回復(fù)
-
材料與化工306分找調(diào)劑
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
一志愿北京科技材料科學(xué)與工程288分，求調(diào)劑
已經(jīng)有10人回復(fù)
-
一志愿同濟(jì)大學(xué)323分（080500）求調(diào)劑
已經(jīng)有6人回復(fù)
-
一志愿085600中科院寧波所276分求調(diào)劑
已經(jīng)有26人回復(fù)
-
材料專碩322分
已經(jīng)有7人回復(fù)
-
材料調(diào)劑
已經(jīng)有4人回復(fù)
-
294分080500材料科學(xué)與工程求調(diào)劑
已經(jīng)有17人回復(fù)
» 本主題相關(guān)價(jià)值貼推薦，對(duì)您同樣有幫助:
- 感受態(tài)細(xì)胞制備
已經(jīng)有8人回復(fù)
- DH5α感受態(tài)細(xì)胞和JM109的區(qū)別是什么？
已經(jīng)有8人回復(fù)
- DB3.1高效感受態(tài)細(xì)胞制備問(wèn)題
已經(jīng)有4人回復(fù)
- 電轉(zhuǎn)化DH5α感受態(tài)
已經(jīng)有16人回復(fù)
- 請(qǐng)問(wèn)制備的電轉(zhuǎn)化的感受態(tài)細(xì)胞可以用于化學(xué)轉(zhuǎn)化操作嗎？
已經(jīng)有3人回復(fù)
- TSS方法制備感受態(tài)細(xì)胞（樓主已測(cè)試過(guò)，非常實(shí)用）
已經(jīng)有67人回復(fù)
- 畢赤酵母用于電轉(zhuǎn)化制備感受態(tài)細(xì)胞步驟
已經(jīng)有13人回復(fù)
- 感受態(tài)細(xì)胞的制備（DH5α大腸桿菌）
已經(jīng)有73人回復(fù)
- 為什么要制備感受態(tài)細(xì)胞，制備感受態(tài)細(xì)胞的目的與意義是什么？
已經(jīng)有3人回復(fù)
- 細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)小牛血清等分裝的時(shí)候用的離心管沒(méi)有高壓滅菌該怎么辦？
已經(jīng)有13人回復(fù)
- 感受態(tài)細(xì)胞轉(zhuǎn)化后的存放問(wèn)題
已經(jīng)有8人回復(fù)
- 感受態(tài)細(xì)胞轉(zhuǎn)化
已經(jīng)有17人回復(fù)
- E.coli TOP10 從哪里買(mǎi)到？
已經(jīng)有14人回復(fù)
- 大腸桿菌DH5α感受態(tài)制備
已經(jīng)有21人回復(fù)
- 一個(gè)關(guān)于感受態(tài)轉(zhuǎn)化效率的問(wèn)題
已經(jīng)有11人回復(fù)
- 感受態(tài)的制備及轉(zhuǎn)化？
已經(jīng)有13人回復(fù)
- 【求助/交流】在線等：E.coli BL21 轉(zhuǎn)化子在kan平板上要長(zhǎng)多久
已經(jīng)有8人回復(fù)
- 【資料】超級(jí)感受態(tài)制備方法-英文版
已經(jīng)有124人回復(fù)
- 【求助/交流】E.coli K-12
已經(jīng)有7人回復(fù)
- 【求助/交流】求助：酵母感受態(tài)細(xì)胞的制備
已經(jīng)有9人回復(fù)
- 【求助/交流】制備BL21(DE3)感受態(tài)細(xì)胞及質(zhì)粒轉(zhuǎn)化操作步驟
已經(jīng)有9人回復(fù)
- 電轉(zhuǎn)化注意事項(xiàng)
已經(jīng)有14人回復(fù)
- 微生物學(xué)考研資料1(沈萍版同步）免幣分享
已經(jīng)有67人回復(fù)
緣來(lái)是伊
木蟲(chóng) (小有名氣)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 1640.4
- 散金: 24
- 帖子: 51
- 在線: 75.8小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 2151125
- 注冊(cè): 2012-11-27
- 性別: GG
- 專業(yè): 環(huán)境微生物學(xué)
送紅花一朵 4樓2015-05-15 17:37:13
★
小木蟲(chóng): 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
小木蟲(chóng): 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
|
用氯化鈣制備和轉(zhuǎn)化感受態(tài)大腸桿菌 大腸桿菌E.coli DH5a感受態(tài)細(xì)胞的制備參照《分子克隆實(shí)驗(yàn)指南》的方法進(jìn)行 1. 緩沖液和溶液： ①CaCl2 •2H2O（1mol/L） 注：制備感受態(tài)細(xì)胞時(shí)，取出10ml貯存液加90ml純水稀釋至100ml，用預(yù)處理的Nalgene 濾膜（0.45um孔徑）過(guò)濾除菌，放置冰上。 ② CaCl2-MgCl2溶液冰上預(yù)冷 2. 培養(yǎng)基 ①LB 液體LB培養(yǎng)基的配方如下: 胰蛋白胨(Tryptone) 10g/L；酵母提取物(Yeast extract) 5g/L；氯化鈉(NaCl) 10g/L 搖動(dòng)容器直至溶質(zhì)溶解（或加熱攪拌）.用5mol/L NaOH(約0.2ml)調(diào)節(jié)該培養(yǎng)基的pH,使其達(dá)到7.0(該pH適合目前使用最廣的原核表達(dá)菌種E.coli的生長(zhǎng))，在15psi（1.05Kg/cm2=103kPa）,121.3℃蒸汽滅菌20min。 固體加15g瓊脂粉（若不易溶解時(shí)，不斷加熱攪拌） 抗生素的加入：高壓滅菌后，將融化的LB固體培養(yǎng)基置于55℃的水浴中，待培養(yǎng)基溫度降到55℃時(shí)（手可觸摸）加入抗生素，以免溫度過(guò)高導(dǎo)致抗生素失效，并充分搖勻。 ②SOC 除加入20mmol/L葡萄糖外，其他成分與SOB培養(yǎng)基相同。SOB培養(yǎng)基經(jīng)過(guò)高壓滅菌后冷卻至60℃或60℃以下，加20mL除菌的1mol/L葡萄糖溶液（1mol/L葡萄糖溶液的配制方法是：用90mL去離子水溶解18g葡萄糖，完全溶解后，用去離子水（蒸餾水）定容至100ml,用0.22um氯氣過(guò)濾除菌）。 SOB培養(yǎng)基：配制每升培養(yǎng)基，在950ml去離子水（蒸餾水）中加入：胰化蛋白胨 20g，酵母提取物5g，NaCl 0.5g 搖動(dòng)溶液是溶質(zhì)完全溶解。加10ml 250mmol/L KCl溶液（將1.86gKCl用100mL去離子水溶解即配成250mmol/L的KCl溶液）。用5mol/L NaOH調(diào)節(jié)該培養(yǎng)基的pH,使其達(dá)到7.0。用去離子水定容至1L。在15psi高壓下蒸汽滅菌20min。該溶液在使用前，加入5mL滅菌的2mol/L的MgCl2(90ml去離子水溶解19g MgCl2，用去離子水調(diào)整體積為100ml，在15psi高壓下整齊滅菌20min) 3.實(shí)驗(yàn)過(guò)程 A：用接種環(huán)取少量細(xì)菌保存液接種，37℃培養(yǎng)16-20h B：取大腸桿菌DH5a單菌落，接種于5mL液體LB培養(yǎng)基中，于37℃振蕩培養(yǎng)過(guò)夜 C：取0.5mL上述過(guò)夜培養(yǎng)物，按1：100的稀釋比例倒入20mL LB液體培養(yǎng)基中37℃振蕩培養(yǎng)3-4h。 注：為達(dá)到高的轉(zhuǎn)化效率，活細(xì)胞數(shù)目務(wù)必小于108個(gè)/L，對(duì)大多數(shù)大腸桿菌來(lái)說(shuō)，這相當(dāng)于OD600值為0.4左右。為保證細(xì)菌培養(yǎng)物的生長(zhǎng)密度不致過(guò)高，可每隔15-20min測(cè)定OD600來(lái)監(jiān)控，用監(jiān)控的時(shí)間及OD600值列一個(gè)圖表，以便預(yù)測(cè)培養(yǎng)物的OD600值達(dá)到0.4的時(shí)間，當(dāng)OD值達(dá)到0.35時(shí)，收獲細(xì)菌培養(yǎng)物。 不同菌株的OD值與活菌數(shù)關(guān)系差異很大，因此有必要測(cè)定所用菌株的對(duì)應(yīng)關(guān)系。以LB瓊脂平板計(jì)算每一時(shí)刻的細(xì)菌活菌數(shù)，從而是分光光度計(jì)的讀數(shù)標(biāo)準(zhǔn)化。 D：將培養(yǎng)液轉(zhuǎn)移到預(yù)冷的50mL無(wú)菌離心管中，冰浴30min，使菌液冷卻至0℃，于4℃4000r／min離心10min，棄上清液（培養(yǎng)液倒出后，將管倒置1min以使最后的痕量培養(yǎng)液流盡） D：每50ml初始培養(yǎng)液用30ml預(yù)冷的0.1mol/L CaCl2-MgCl2溶液（80mmol/L MgCl2,20 mmol/L CaCl2），即每支離心管沉淀中加入30mL冰浴的CaCl2-MgCl2溶液，重懸每份細(xì)胞沉淀。 E：于4℃ 4100r／min離心10min，棄上清液（培養(yǎng)液倒出后，將管倒置1min以使最后的痕量培養(yǎng)液流盡）以回收細(xì)胞 F：每50ml初始培養(yǎng)液用2ml預(yù)冷的0.1mol/L CaCl2溶液重懸每份細(xì)胞沉淀即每支離心管沉淀中加入2mL冰浴的CaCl2溶液。 G：分裝后于液氮中迅速冷凍，置-70℃冰箱中，長(zhǎng)期保存，也可立即使用 |
» 本帖已獲得的紅花（最新10朵）
3樓2015-05-15 09:58:46
xiaochong8693
木蟲(chóng)之王 (文壇精英)
- 應(yīng)助: 58 (初中生)
- 金幣: 74351.8
- 散金: 3788
- 紅花: 233
- 帖子: 47068
- 在線: 2659.7小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 752823
- 注冊(cè): 2009-04-20
- 專業(yè): 動(dòng)物學(xué)
7樓2015-05-15 18:19:22
602059625
金蟲(chóng) (知名作家)
- MicEPI: 1
- 應(yīng)助: 4 (幼兒園)
- 金幣: 1541.8
- 散金: 1236
- 紅花: 59
- 沙發(fā): 23
- 帖子: 7530
- 在線: 4557.6小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 1025998
- 注冊(cè): 2010-05-22
- 性別: GG
- 專業(yè): 地球內(nèi)部物理學(xué)
8樓2015-05-17 22:08:32
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 一志愿085600中科院寧波所276分求調(diào)劑 +25 | 材料學(xué)257求調(diào)劑 2026-03-28 | 26/1300 |
|
|---|---|---|---|---|
|
|
[考研] 085600 295分求調(diào)劑 +16 | W55j 2026-03-30 | 19/950 |
|
|
|
[考研] 085601一志愿中山大學(xué)深圳材料工程330求調(diào)劑 +8 | pipiver 2026-03-30 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 266分，一志愿電氣工程，本科材料，求材料專業(yè)調(diào)劑 +10 | 哇呼哼呼哼 2026-04-01 | 11/550 |
|
|
|
[考研] 生醫(yī)工0831調(diào)劑求推薦 +5 | 小熊睿睿_s 2026-03-27 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 材料求調(diào)劑一志愿哈工大324 +8 | 閆旭東 2026-03-28 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 材料求調(diào)劑 +8 | 呢呢妮妮 2026-04-01 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 材料調(diào)劑 +12 | 一樣YWY 2026-04-01 | 12/600 |
|
|
|
[考研] 310分求調(diào)劑 +4 | 成功上岸wang 2026-04-01 | 4/200 |
|
|
[考研] 086502化學(xué)工程342求調(diào)劑 +7 | 阿姨復(fù)古不過(guò) 2026-03-27 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑 +5 | 零八# 2026-03-27 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 材料調(diào)劑 +10 | Eujd1 2026-03-31 | 11/550 |
|
|
|
[考研] 一志愿 南京航空航天大學(xué) ，080500材料科學(xué)與工程學(xué)碩 +10 | @taotao 2026-03-31 | 11/550 |
|
|
|
[考研] 333求調(diào)劑 +4 | 阿科逸 2026-03-31 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 0856求調(diào)劑 +9 | 楒桉 2026-03-28 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 英一數(shù)一總分334求調(diào)劑 +4 | 陳陽(yáng)坤 2026-03-31 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 一志愿中海洋320化學(xué)工程與技術(shù)學(xué)碩求調(diào)劑 +8 | 披星河 2026-03-30 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 一志愿華中師范化學(xué)332分求調(diào)劑 +3 | Lyy930824@ 2026-03-29 | 3/150 |
|
|
|
[考研]
 105500藥學(xué)求調(diào)劑，一志愿山東大學(xué)藥學(xué)，348分
+3
|
gr哈哈哈 2026-03-28 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 356求調(diào)劑 +4 | gysy?s?a 2026-03-28 | 4/200 |
|