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岳士忠新蟲 (正式寫手)
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sds-page跑出來竟然是這樣的！哪位大俠知道原因？ 已有2人參與
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cicelyzh
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2樓2015-05-16 04:24:23
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3樓2015-05-16 20:56:47
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【答案】應(yīng)助回帖
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10.目的蛋白質(zhì)條帶模糊 電泳凝膠濃度選擇不當(dāng)。 低于10Kd的小分子蛋白質(zhì)要用Tricine膠。 靠近前沿的電泳帶分辨率不佳。根據(jù)分子量與凝膠孔徑的關(guān)系，選擇適當(dāng)濃度的凝膠。 蛋白質(zhì)樣品水解。注意除去蛋白質(zhì)樣品的內(nèi)源性的水解酶，不要反復(fù)凍融。 電泳時間過長或過短。溴酚藍(lán)達(dá)到分離膠的底部即應(yīng)該關(guān)閉電泳電源。 緩沖溶液、SDS都要新鮮配制。 避免加樣過多，提高分辨率。小體積樣品可給出窄帶，加樣體積根據(jù)樣品濃度和凝膠厚度靈活掌握。一般上樣體積為10-15uL（即2-10ug蛋白質(zhì)）。 加熱變性后的蛋白質(zhì)樣品要放置到室溫即電泳，不要久放，因為蛋白質(zhì)的二硫鍵在高溫下可能是會斷開，但是暴露于空氣中溫度降低會重新形成二硫鍵，而且可能在過久放置過程中蛋白質(zhì)可能會再折疊，更不要扔到冰箱里保存。 摘抄自SDS-PAGE電泳常見問題解析（FAQ） |
6樓2015-05-18 11:06:00
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