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[求助]
怎么判斷表達(dá)的蛋白是胞內(nèi)的還是胞外的 已有4人參與
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| 各位蟲(chóng)友們，最近將一個(gè)外源基因重組轉(zhuǎn)化至大腸桿菌BL21(DE3)中，誘導(dǎo)表達(dá)之后，怎樣判斷表達(dá)的蛋白是胞內(nèi)的還是胞外的呢？還有怎樣判斷形成的是包涵體還是可溶性蛋白呢？多這幾個(gè)概念都很模糊，希望大家指導(dǎo)一下，不勝感激！ |
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zoelxx
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4樓2015-06-08 09:02:45
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【答案】應(yīng)助回帖
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大腸桿菌分泌外源蛋白質(zhì)經(jīng)常形成包涵體，其中原因之一是表達(dá)的量太多和速度太快，但是組成包涵體的蛋白質(zhì)已不是一開(kāi)始就是直接結(jié)合到包涵體上，而是首先也是游離的，當(dāng)然如果形成了包涵體，肯定最大量的目的蛋白質(zhì)是在包涵體。 至于目的蛋白質(zhì)是不是外源表達(dá)，一般設(shè)計(jì)密碼時(shí)沒(méi)有導(dǎo)肽一般不可能是外源表達(dá)的，而且能夠分泌到細(xì)胞外的話(huà)，表達(dá)量都比較低，不太可能形成包涵體。 |
5樓2015-06-08 09:32:30
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