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人于兩點(diǎn)銅蟲 (小有名氣)
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[求助]
DNA降解問題(求解釋原因) 已有2人參與
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從sigma買的Deoxyribonucleic acid, low molecular weight from salmon sperm(脫氧核糖核酸,來自三文魚的精子)。這東西放在4度冰箱兩年了,現(xiàn)在發(fā)現(xiàn)用水溶DNA呈酸性,pH=4.這是不是說明,這樣品降解了。那么降解后的DNA,A260/A280的值會怎么變化呢?最近實驗老是不能重復(fù),被老板罵,所以希望各位兄弟姐妹,踴躍發(fā)言,金幣絕對不會少的。![]() |
木蟲 (正式寫手)
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是以干粉的形式保存在冰箱里,中途也沒拆開過嗎? 1.我感覺應(yīng)該能用,溶在水中測得的pH也不一定是DNA降解導(dǎo)致的,因為本身樣品中的成分本身就很雜,還有相當(dāng)量的蛋白,按照說明書上寫的,只要用50 mM Tris pH 8.0溶解了,A260/280在1.4左右應(yīng)該就能用。 2.這個東西后期還得超聲處理吧,后期還得抽提、煮沸一類的。你要是不放心處理完可以跑個電泳檢測一下。只要DNA出現(xiàn)帶型應(yīng)該就沒啥問題。 3.用這個做封閉嗎?本身雜交就得多做幾次,特別是前期還有預(yù)處理,可能對你的結(jié)果影響更直接。 |

銅蟲 (小有名氣)
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干粉一般用的時候再溶,長期不用的放在低溫保存,所以在溶完之后,最好分裝一下。短期用的放4度木有問題,其他的扔低溫保存。 你這放4度都兩年了,能用的可能性不大(我也是做DNA方面的,放4度兩周,我基本就不用了)。如果可以的話,直接換新的吧。 |

銅蟲 (小有名氣)
銅蟲 (小有名氣)
木蟲 (正式寫手)
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一般做雜交的封閉液是需要把魚精DNA給預(yù)處理的。直接拿DNA這東西做營養(yǎng)源我還真沒做過,不清楚是否需要預(yù)處理。不過我感覺如果DNA做營養(yǎng)物的話,對魚精DNA質(zhì)量要求不高。 1.一般細(xì)胞拿DNA做營養(yǎng)物需要在體外將其降解為堿基、脫氧核糖、磷酸才能被細(xì)胞攝取入體內(nèi)。你添加的DNA再完整作為營養(yǎng)物也必然會被外源核酸酶、磷脂酶給降解掉才能被吸收,這個過程中大量磷酸釋放出來,pH肯定是要下降的,因此有必要的話需要加入緩沖液維持培養(yǎng)基的pH。 2.你買的這個DNA是low molecular weight DNA,可能已經(jīng)預(yù)處理過了。pH 4左右可能就是其正常的pH值,直接用Tris buffer溶解就可以用了,整個培養(yǎng)基可以用Tris buffer 調(diào)一下pH試試看 |

銅蟲 (小有名氣)
銅蟲 (小有名氣)
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