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徐官?zèng)_123新蟲 (小有名氣)
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[求助]
求長(zhǎng)片段pcr擴(kuò)增大神！�。。�！ 已有11人參與
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本人最近在擴(kuò)增長(zhǎng)片段pcr，目的片段是7445bp，擴(kuò)增原理：先用兩對(duì)兼并引物各擴(kuò)增出1000bp左右的片段，在根據(jù)這兩個(gè)片段設(shè)計(jì)特異性引物擴(kuò)增。但是設(shè)計(jì)了好幾對(duì)特異性引物都沒有擴(kuò)出長(zhǎng)片段，新手不知道是模板濃度不夠？基因組DNA濃度是260ng/ul，還是引物不夠長(zhǎng)？現(xiàn)在是25bp，是否需要添加甜菜堿等類的物質(zhì)？新手頭一回做這個(gè)，師哥沒有做過并且已經(jīng)畢業(yè)了，老師對(duì)這個(gè)也不太懂，周圍同學(xué)也沒做過這么長(zhǎng)的片段，跪求大神指導(dǎo)，順道給個(gè)建議，感激不盡 |
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zhangyunjing
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2樓2015-07-02 16:37:28
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【答案】應(yīng)助回帖
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
| 考慮這么多，直接用長(zhǎng)片段PCRLA Taq DNA聚合酶試劑盒就行了，簡(jiǎn)單模板可以擴(kuò)增三十幾kb，基因組也可以擴(kuò)增20kb的啊，，，你的酶沒用對(duì)吧 |
4樓2015-07-02 17:15:36
徐官?zèng)_123
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5樓2015-07-02 18:40:13
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6樓2015-07-02 18:44:35
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7樓2015-07-02 18:51:11
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8樓2015-07-02 21:53:27
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9樓2015-07-02 22:42:22
baichi121234
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10樓2015-07-02 23:03:50
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