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小枯草銅蟲 (初入文壇)
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[求助]
層析純化出了問題 已有3人參與
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用葡聚糖凝膠G100純化蛋白，TRIS-HCl8.0的層析純化圖如下，哪位高人幫我指點一下 捕獲.PNG |
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a86052
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2樓2015-07-09 09:15:37
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【答案】應(yīng)助回帖
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我都要去下去吃飯了，現(xiàn)在正餓著那。不過我還是回答你吧。 你的層析峰有幾個明顯的問題： 1.分辨率低，2.對稱性差，出現(xiàn)肩峰。 解決辦法： 1.分辨率低。 (1)提高裝柱的質(zhì)量，使得色譜柱介質(zhì)均勻。 (2)適當(dāng)?shù)奶岣咧驳母叨取?br /> (3)控制上樣體積，上樣量一般為柱床體積的1%-4%。 (4)減少樣品的粘度，可以加入少量表面活性劑增溶。 (5)根據(jù)樣品的特點，選用合適的習(xí)題哦溶液，調(diào)節(jié)洗脫溶液的離子強(qiáng)度和親水性。 |
6樓2015-07-16 14:12:04
小枯草
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4樓2015-07-13 14:29:22
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5樓2015-07-15 20:12:41
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7樓2015-07-16 14:13:05
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【答案】應(yīng)助回帖
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2.對稱性差，肩縫好像不明顯。 （1）提高裝柱的質(zhì)量，使得色譜柱介質(zhì)均勻。裝入層析柱的介質(zhì)要一次性全部裝完，太松會引起拖尾峰，太緊會引起前延峰。 （2）樣品與凝膠柱的介質(zhì)存在非特性地吸附，所以應(yīng)該改變和選擇合適的流動相。 （3）層析柱介質(zhì)以前使用后沒有清潔，有不少雜質(zhì)附著，應(yīng)再生色譜柱�？梢杂�0.2mol/LNaOH或者1mol/L NaCl 洗去雜質(zhì)，再用雙蒸餾水平衡，就在原層析柱上原位操作，在分離樣品之前進(jìn)行。 |
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小枯草8樓2015-07-16 19:15:55
小枯草
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【答案】應(yīng)助回帖
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一般蛋白質(zhì)層析都不用純水作流動相，而是用緩沖溶液作為流動相。 1.MMB11-Practical Protein Chromatography(1992)with contents http://www.gaoyang168.com/bbs/viewthread.php?tid=6382285 2.Guide to Protein Purification(2nd edition)METHODS IN ENZYMOLOGY Vol-463 http://www.gaoyang168.com/bbs/viewthread.php?tid=6382232 參考一下吧。 |
10樓2015-07-16 21:33:58
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