 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 5 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 1376 | 回復(fù): 4 | |||
| 當前只顯示滿足指定條件的回帖，點擊這里查看本話題的所有回帖 | |||
[求助]
求助重疊延伸PCR 已有1人參與
|
|||
| 求助重疊延伸PCR的基本原理和方法 |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
不合理蛙科研實驗中的趣事：實驗器材的 “烏龍”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實驗中的趣事：和實驗材料的 “斗智斗勇”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤色/翻譯怎么收費?
已經(jīng)有104人回復(fù)
-
蛋白質(zhì)檢測：精準分析，解鎖生物分子的密碼
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實驗之小鼠實驗：嚴謹設(shè)計，解析生命機制的重要載體
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實驗之重金屬檢測：精準篩查，守護健康與環(huán)境的防線
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實驗之“蛙測重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實驗之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標南京
已經(jīng)有0人回復(fù)
» 本主題相關(guān)價值貼推薦，對您同樣有幫助:
- 求助重疊延伸pcr
已經(jīng)有0人回復(fù)
- 請問如何使短DNA片段首尾相連增長為長片段？
已經(jīng)有0人回復(fù)
- 重疊延伸PCR的高手，求助�。。。�！
已經(jīng)有24人回復(fù)
- 求助重疊延伸pcr
已經(jīng)有5人回復(fù)
- 重疊延伸PCR引物合成求助
已經(jīng)有15人回復(fù)
- 求助，急急急！重疊延伸PCR方法做定點突變
已經(jīng)有0人回復(fù)
- 【求助/交流】求助重疊PCR的問題，有哪位高手能幫忙看看，不勝感激！
已經(jīng)有1人回復(fù)
- 【求助/交流】重疊延伸
已經(jīng)有2人回復(fù)
- 【求助/交流】重疊PCR的問題???
已經(jīng)有7人回復(fù)
- 【求助/交流】急求文獻一篇 謝謝
已經(jīng)有3人回復(fù)
- 【求助/交流】關(guān)于PCR
已經(jīng)有10人回復(fù)
- 【求助/交流】重疊延伸pcr第二輪條帶較弱，彌散
已經(jīng)有12人回復(fù)
|
。。。。。。 |
3樓2015-11-17 14:09:42
Tintin77
木蟲 (正式寫手)
- 應(yīng)助: 1 (幼兒園)
- 金幣: 2826.8
- 紅花: 1
- 帖子: 550
- 在線: 42.6小時
- 蟲號: 4157320
- 注冊: 2015-10-19
- 性別: MM
- 專業(yè): 食品加工技術(shù)
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ...
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
曲酒封琴: 金幣+200, ★★★★★最佳答案, 好有幫助啊，受益匪淺。。。。 2015-11-17 14:06:01
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
曲酒封琴: 金幣+200, ★★★★★最佳答案, 好有幫助啊，受益匪淺。。。。 2015-11-17 14:06:01
|
重疊延伸PCR技術(shù)(gene splicing by overlap extension PCR,簡稱SOE PCR)由于采用具有互補末端的引物,使PCR產(chǎn)物形成了重疊鏈,從而在隨后的擴增反應(yīng)中通過重疊鏈的延伸,將不同來源的擴增片段重疊拼接起來.此技術(shù)利用PCR技術(shù)能夠在體外進行有效的基因重組,而且不需要內(nèi)切酶消化和連接酶處理,可利用這一技術(shù)很快獲得其它依靠限制性內(nèi)切酶消化的方法難以得到的產(chǎn)物.重疊延伸PCR技術(shù)成功的關(guān)鍵是重疊互補引物的設(shè)計.重疊延伸PCR在基因的定點突變、融合基因的構(gòu)建、長片段基因的合成、基因敲除以及目的基因的擴增等方面有其廣泛而獨特的應(yīng)用。 以下是重疊延伸PCR的原理及兩基因的引物設(shè)計： A基因： 上游（F1）與開放閱讀框起始密碼子附近的序列相對應(yīng)，并在5 ’末端添加酶切位點和3個保護堿基；下游（R1）與A基因終止密碼子附近的序列及B基因5’末端起始密碼子附近的序列互補，并去除A基因的終止密碼子TAA B基因： 上游（F2）與A基因終止密碼子附近的序列及B基因5 ’端起始密碼子附近的序列相對應(yīng)，同樣去除A基因終止密碼子TAA；下游（R2）與B基因的開放閱讀框終止密碼子序列互補，并在5’末端添加酶切位點和2個保護堿基。 先分別用F1、R1，F(xiàn)2、R2擴增出A和B基因，然后再用F1和R2將兩基因連接起來，得到融合基因。 外定點突變技術(shù)是研究蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)和功能之間的復(fù)雜關(guān)系的有力工具，也是我們在實驗室中改造/優(yōu)化基因常用的手段。而采用重疊引物PCR介導(dǎo)的定點突變實驗是一種快速有效的在基因中特定位點引入特定突變的有效技術(shù)。該技術(shù)采用具有互補末端的引物，使PCR產(chǎn)物形成了重疊鏈, 從而在隨后的擴增反應(yīng)中通過重疊鏈的延伸，將不同來源的擴增片段重疊拼接起來。此技術(shù)利用PCR技術(shù)能夠在體外進行有效的基因重組，而且不需要內(nèi)切酶消化和連接酶處理，可利用這一技術(shù)很快獲得其它依靠限制性內(nèi)切酶消化的方法難以得到的產(chǎn)物。該技術(shù)主要包括以下幾步：設(shè)計引物，PCR擴增基因兩端，回收兩端片段，兩端片段退火延伸，擴增全長基因。 |
2樓2015-11-17 14:05:03
九品品
新蟲 (初入文壇)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 26
- 帖子: 11
- 在線: 2.6小時
- 蟲號: 3262308
- 注冊: 2014-06-08
- 專業(yè): 微生物生理與生物化學(xué)
4樓2016-10-22 11:21:09
Tintin77
木蟲 (正式寫手)
- 應(yīng)助: 1 (幼兒園)
- 金幣: 2826.8
- 紅花: 1
- 帖子: 550
- 在線: 42.6小時
- 蟲號: 4157320
- 注冊: 2015-10-19
- 性別: MM
- 專業(yè): 食品加工技術(shù)
5樓2016-10-28 22:55:54
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 277分求調(diào)劑，跨調(diào)材料 +3 | 考研調(diào)劑lxh 2026-03-24 | 3/150 |
|
|---|---|---|---|---|
|
|
[考研] 收08調(diào)劑生 +3 | komorebi69 2026-03-18 | 3/150 |
|
|
[考研] 344求調(diào)劑 +3 | desto 2026-03-24 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 一志愿哈工大，085400，320，求調(diào)劑 +3 | gdlf9999 2026-03-24 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 環(huán)境學(xué)碩288求調(diào)劑 +8 | 皮皮皮123456 2026-03-22 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 317求調(diào)劑 +12 | 申子申申 2026-03-19 | 18/900 |
|
|
|
[考研] 306求調(diào)劑 +5 | 來好運來來來 2026-03-22 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 一志愿北京化工大學(xué)070300 學(xué)碩336求調(diào)劑 +5 | vv迷 2026-03-21 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 285求調(diào)劑 +6 | ytter 2026-03-22 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 一志愿華中科技大學(xué)071000，求調(diào)劑 +4 | 沿岸有貝殼6 2026-03-21 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 初試 317 +7 | 半拉月丙 2026-03-20 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 材料與化工（0856）304求B區(qū)調(diào)劑 +3 | 邱gl 2026-03-20 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 求助 +5 | 夢里的無言 2026-03-21 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 0805材料320求調(diào)劑 +3 | 深海物語 2026-03-20 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 一志愿重慶大學(xué)085700資源與環(huán)境專碩，總分308求調(diào)劑 +3 | 墨墨漠 2026-03-18 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 274求調(diào)劑 +10 | S.H1 2026-03-18 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 295求調(diào)劑 +4 | 一志愿京區(qū)211 2026-03-18 | 6/300 |
|
|
|
[考研]
 材料與化工 322求調(diào)劑
+4
|
然11 2026-03-19 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 290求調(diào)劑 +7 | ^O^乜 2026-03-19 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 收復(fù)試調(diào)劑生 +4 | 雨后秋荷 2026-03-18 | 4/200 |
|