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插入質粒啟動子下游的是DNA模板鏈還是編碼鏈？ 已有4人參與
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各位大俠： 小弟菜鳥，被2個問題困得茶飯不思，懇請各位大俠鼎力相助： 1.構建質粒時，我們通用genebank上查到的mRNA序列插入質粒，并置于啟動子下端，進行轉錄和翻譯表達。但這2天犯渾了，突然想，質粒首先要將插入片段轉錄成mRNA（即跟genebank上查到的序列一致的序列），然后以mRNA為模板進行翻譯。但轉錄都是以DNA模板鏈轉錄成mRNA,所以插入質粒的序列應該是mRNA互補的那條鏈，即模板鏈，而不是genebank上查到的mRNA序列，但我們通常都是將mRNA序列擴增后插入，并置于啟動子下，這是怎么回事？是不是我以前都做錯了？一下糊涂了。再者，啟動子是與RNA聚合酶結合的地方，從而啟動轉錄，故，啟動子也應位于模板鏈而不是位于編碼鏈，可啟動子就是位于編碼基因5端上游，這是為何？徹底糊涂！ 2.表達質粒通常都有一個強有力地啟動子并設計好了各種表達調控原件，以有利于基因轉錄與表達。但外源基因在經啟動子啟動轉錄成mRNA后，單鏈mRNA是不是就跟質粒脫離了，從而在胞質內進行翻譯，那這樣，質粒那些表達調控原件又如何能調控mRNA的翻譯表達呢？越想越糊涂，望各位大俠不吝賜教！非常非常感謝大家！ |
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 蟲友問答-分子生物 |
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這個朋友提的問題很有意思，很多人估計從未想過這是個什么問題。 分子生物學上說，轉錄的時候，RNA polymerase從promoter啟動，以DNA模板的一條鏈作為模板，合成和模板互補配對的鏈即RNA產物，這條鏈于是叫做模板鏈。但是這個問題似乎沒有什么實際應用價值，我們在克隆基因，做體外轉錄等等的時候，從genebank拿到一條序列，然后裝上酶切位點，唰唰插到質粒的啟動子下游就可以了，轉錄出來的自然就是genebank上顯示的那條序列。 直到我遇到一個問題，在做RNA體外轉錄的時候，當需要精確計算RNA產物的大小，面對酶切得到的這樣一個模板，產生的RNA是什么呢？ eg： 5’-T7 promoter-XXXXXXXXTCTAGA-3‘ 3‘-T7 promoter-XXXXXXXXAGATCT-5’ 這樣一個產物大家都知道，轉錄產物一定是GGG-XXXXXXXXTCTAGA 但是面對酶切產物，模板變成了 5’-T7 promoter-XXXXXXXXT-3‘ 3‘-T7 promoter-XXXXXXXXAGATC-5’ RNA轉錄出來，是GGG-XXXXXXXXT？還是GGG-XXXXXXXXTCTAG？ 或者為什么，我們把從genebank上拿來的序列，裝到載體的promoter下方，就一定轉錄出來我們插入的序列？ 所以我們裝進入的到底是什么序列？ 這里面應該是有一個約定俗成的問題，即，genebank上給出的是mRNA，是翻譯的模板，沒有問題。 但是我們以這條鏈得到的DNA，跟mRNA方向一致的那條鏈并非載體promoter的模板鏈，而是非模板鏈 也就是說，載體上的promoter，是以插入DNA的另一條鏈，也就是跟mRNA互補的那條鏈為模板進行轉錄的 所以上面那個不平齊的模板，產生的ＲＮＡ應該是GGG-XXXXXXXXTCTAG |
3樓2015-12-10 10:58:19
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