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T_Stranger新蟲 (初入文壇)
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[交流]
表達(dá)載體與目的基因連接不上
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膠回收的表達(dá)載體pET28與目的基因neua，連接體系為：pET28:1μ，neua:4μ，solution Ⅰ：5μ，過夜連接，在卡那抗性的平板里面長出來部分，全部菌P沒有條帶，自己分析應(yīng)該是抗性濃度過低，使得原始感受態(tài)長出來部分，可是為什么菌P一個(gè)目的條帶都沒有，已經(jīng)做了五六次菌p都是這樣，有大神能分析一下嗎 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
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| 要做對(duì)照，估計(jì)表達(dá)載體pET28酶切不完全，而且連接效率又不高，所以導(dǎo)致空載體長出菌，就會(huì)P一個(gè)目的條帶都沒有。 |
T_Stranger5樓2017-04-28 15:33:50
zdty
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西門吹雪170: 金幣+1, 鼓勵(lì)回帖交流 2017-05-06 08:21:00
| 有沒有考慮過載體自連，你應(yīng)該做個(gè)負(fù)對(duì)照，這樣就能比較出，是不是平板上長出來的都是載體自連了 |
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3樓2017-04-28 15:12:15
douglaspei
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是切膠回收的吧？涂板后不要超過14小時(shí)，過了就長敏感菌了。載體與目的基因是摩爾數(shù)比，不是體積比。 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
6樓2017-04-28 22:37:39
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8樓2017-05-03 14:49:52
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