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panyax新蟲 (初入文壇)
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[求助]
目的條帶pcr之后，片段很暗 已有1人參與
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模板用的是別人構(gòu)建好的表達(dá)載體，是滴在濾紙上溶出來的。經(jīng)過pcr條帶之后的目的條帶很暗。而且用PCR產(chǎn)物做模板，進(jìn)行2次PCR的時(shí)候，連目的片段都擴(kuò)不出來了。求分析下原因。 原來用這個(gè)模板p過，一模一樣的東西， 原來的條帶很亮，只是原來用的是taq酶，片段長(zhǎng)了，保真性不好�，F(xiàn)在用高保真和taq進(jìn)行pcr都是要么p不出來，要么片段很暗。 片段大小在4kb左右，暗的那4條是最近P的，maker用的是1k plus，亮的那2條帶是上個(gè)月初p的，maker用的是15k maker。 求分析下原因啊，急求�。�！ Administrator 2016-06-15 19 時(shí) 19 分.jpg Administrator 2016-05-13 12 時(shí) 59 分.jpg |
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原海亮
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會(huì)不會(huì)是模板濃度不太好，可以將濾紙上的質(zhì)粒融出來后做一次轉(zhuǎn)化，以后需要模板直接搖菌提質(zhì)粒，這樣質(zhì)粒的濃度及純度應(yīng)該比較好的，并且質(zhì)粒作為模板，擴(kuò)增還是相對(duì)比較容易的，如果引物沒問題的話。 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
4樓2016-06-16 22:26:50
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9樓2016-06-17 09:55:00
panyax
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xn8008: 金幣+1, 謝謝積極回帖 2016-06-17 06:57:53
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可能是你的程序有點(diǎn)問題，高保真酶擴(kuò)增比較慢，需要延長(zhǎng)延伸的時(shí)間。 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
5樓2016-06-17 00:07:32
panyax
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6樓2016-06-17 08:10:37
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7樓2016-06-17 08:12:52
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10樓2016-06-18 12:32:00
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