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[求助]
轉(zhuǎn)化后涂平板不長菌 已有2人參與
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問題：目的片段連接PE2載體后轉(zhuǎn)BL-21感受態(tài)細(xì)胞后涂板不長菌 本人操作過程： 連接 連接體系:線性化克隆載體：0.5微升 目的片段（1000-1500bp）: 1.5微升 Enzyme Premix: 5微升 純水 ：3微升 體系配成后，輕輕混勻各組分，至于50度（pcr儀定溫）反應(yīng)15分鐘，至于冰上冷卻5分鐘，存于負(fù)20度冰箱 轉(zhuǎn)化:負(fù)70度取100微升BL-21感受態(tài)細(xì)胞至于冰上解凍2分鐘，加入連接反應(yīng)冷卻液，輕輕混勻，至于冰上30分鐘，42度熱激1分30秒，冰水浴2分鐘，加入600微升LB培養(yǎng)基，37攝氏度孵育10分鐘充分復(fù)蘇，37度200轉(zhuǎn)每分鐘搖45分鐘，6000轉(zhuǎn)離心8分鐘，（超凈工作臺）留100微升培養(yǎng)液吸吹混勻涂板，37度培養(yǎng)箱過夜。 謝謝 |
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小冀-
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3樓2016-09-27 16:49:50
科學(xué)小覃
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2樓2016-09-26 20:14:24
4樓2016-09-28 10:28:29
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