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daifeng銀蟲 (小有名氣)
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[交流]
以NADH為底物的酶的酶活測(cè)定 已有7人參與
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NADH在340nm處有吸光值，我現(xiàn)在利用的酶能氧化NADH成NAD+,所以在測(cè)定該酶的酶活時(shí)，是利用其在340nm處吸光值的減小來(lái)算的，另外我用的是752型分光光度計(jì)，在測(cè)定中有幾個(gè)疑問，想請(qǐng)教一下各位蟲友： 1、吸光值降低到負(fù)值，對(duì)酶活的測(cè)定影響大嗎？ 2、在測(cè)定中每次吸光值都是降到-0.097，而且在加入一個(gè)物質(zhì)時(shí)，酶活降低了將近50%，吸光值還是降到-0.097，這是什么原因呢？ 3、在后面的實(shí)驗(yàn)中，又發(fā)現(xiàn)的是：空白對(duì)照后，在放入樣品前，發(fā)現(xiàn)其吸光值也是-0.097，那么對(duì)“2、”能給出的是什么結(jié)論呢？ 我在這先謝過(guò)各位蟲友啦^_^ |
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3樓2009-11-09 14:12:56
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吸光是正值說(shuō)明你的樣品將光源的光吸收了一部分，要是為負(fù)值……是不是說(shuō)你的樣品有自發(fā)關(guān)現(xiàn)象？所以我覺得你是不是應(yīng)該用你反應(yīng)完了的樣品，也就是NAD+（-0.097）的這個(gè)來(lái)調(diào)零，這樣你在測(cè)定的值就是正值了。 另外你的問題1 可能會(huì)有影響，在負(fù)值時(shí)線性關(guān)系可能會(huì)不好。 問題2 酶活降低，最終生成物濃度不變，這個(gè)說(shuō)明你的酶量降低了一半，或者是有競(jìng)爭(zhēng)性抑制劑在作用。問題3 這說(shuō)明你的空白樣有吸收，用NAD+（-0.097）調(diào)零試試吧，這個(gè)對(duì)2好像沒什么影響吧。 個(gè)人觀點(diǎn)，不一定正確，等待高人指點(diǎn) |
2樓2009-11-09 11:20:11
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