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[交流]
【求助/交流】連接表達載體PET-28A失敗原因 已有14人參與
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| 大家好，我構建表達載體連接PET-28A，已經(jīng)連接多次但都失敗，感受態(tài)細胞也換了幾次，鑒定全是假陽性，這可能是什么原因呢，希望大家多多幫忙！ |
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fungixx
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2樓2010-05-08 14:44:43
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小木蟲(金幣+0.5):給個紅包，謝謝回帖交流
lstt09nk(金幣+1):歡迎多多交流~~ 2010-05-08 18:42:15
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片段切好了就不會有問題 載體要好好切切 pET28a拷貝數(shù)很低 載體抽質粒時抽濃一些 切好一批量大的放著每次取個半微升以后省事 告訴我酶切位點 28a很大 5.5k克隆幾百bp 會不會你鑒定的時候切下來的小片段太稀了沒看見啊 倒個1.2%的膠 構建好以后抽濃點切 酶要過量 溫育3h以上 跑膠再看 酶切鑒定 TAE就不用了 看不出什么來 直接抽提 kana用50就行 用普通的克隆菌 不要用BL21 等確定對了純了再轉BL21 你直接連接測序怎么辦？ pET通用引物有的 但是中國很多公司給的不對 你在哪個城市 上海這邊不行 我一般PCR產(chǎn)物測完了對了再連 |
8樓2010-05-08 16:32:15
9樓2010-05-08 16:51:02
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10樓2010-05-08 17:11:25
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