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未知樹木蟲 (著名寫手)
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[交流]
【求助/交流】如何降低,多克隆抗體非特異性? 已有7人參與
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制備了一種多抗,但是,在進(jìn)行細(xì)胞內(nèi)免疫熒光實(shí)驗(yàn)時,非特異性非常非常的強(qiáng),幾乎與實(shí)驗(yàn)組無法區(qū)分。 制備過程: 1,克隆目的基因至表達(dá)載體pMal-C4x。 2,表達(dá)純化目的蛋白。X-MBP(帶有MBP標(biāo)簽的融合蛋白) 3,純化融合蛋白X-MBP,很純! 4,注射新西蘭大白兔。 5,收集血清。 PS: 注射大白兔之前,沒有切除標(biāo)簽蛋白MBP(約42KDa). 在western blot試驗(yàn)中, 該抗體的特異性非常好。 但是, 當(dāng)用于細(xì)胞實(shí)驗(yàn)室時, 非特異性出奇的高, 實(shí)驗(yàn)組和對照組, 一模一樣, 幾乎看不出任何區(qū)別。 在網(wǎng)上查看看了一些方法, 仍然不是太明白。 如何才能有效地降低特異性。 請各位蟲友支招,萬分感謝~ |
金、磁珠與抗體的結(jié)合 |

木蟲 (著名寫手)
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1、用你純化的重組蛋白偶聯(lián)制作親和層析介質(zhì),然后進(jìn)行親和純化。 2、設(shè)計多肽免疫。 3、非融合表達(dá)目的蛋白。 但不管怎樣免疫,用免疫原偶聯(lián)進(jìn)行親和純化都是需要的。用抗血清效果肯定要差些。 |

金蟲 (正式寫手)

至尊木蟲 (文壇精英)
木蟲 (著名寫手)

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