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未知樹木蟲 (著名寫手)
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[交流]
【求助/交流】如何降低，多克隆抗體非特異性？ 已有7人參與
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制備了一種多抗，但是，在進(jìn)行細(xì)胞內(nèi)免疫熒光實(shí)驗(yàn)時(shí)，非特異性非常非常的強(qiáng)，幾乎與實(shí)驗(yàn)組無(wú)法區(qū)分。 制備過(guò)程： 1，克隆目的基因至表達(dá)載體pMal-C4x。 2，表達(dá)純化目的蛋白。X-MBP（帶有MBP標(biāo)簽的融合蛋白） 3，純化融合蛋白X-MBP，很純！ 4，注射新西蘭大白兔。 5，收集血清。 PS： 注射大白兔之前，沒有切除標(biāo)簽蛋白MBP（約42KDa）. 在western blot試驗(yàn)中， 該抗體的特異性非常好。 但是， 當(dāng)用于細(xì)胞實(shí)驗(yàn)室時(shí)， 非特異性出奇的高， 實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組， 一模一樣， 幾乎看不出任何區(qū)別。 在網(wǎng)上查看看了一些方法， 仍然不是太明白。 如何才能有效地降低特異性。 請(qǐng)各位蟲友支招，萬(wàn)分感謝~ |
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 金、磁珠與抗體的結(jié)合 |
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未知樹
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小木蟲(金幣+0.5):給個(gè)紅包，謝謝回帖交流
dhd997(金幣+5): good 2011-02-15 14:11:36
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dhd997(金幣+5): good 2011-02-15 14:11:36
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1、用你純化的重組蛋白偶聯(lián)制作親和層析介質(zhì)，然后進(jìn)行親和純化。 2、設(shè)計(jì)多肽免疫。 3、非融合表達(dá)目的蛋白。 但不管怎樣免疫，用免疫原偶聯(lián)進(jìn)行親和純化都是需要的。用抗血清效果肯定要差些。 |
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hyanzi99203樓2011-02-15 09:30:23
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4樓2011-02-15 14:05:21
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