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未知樹木蟲 (著名寫手)
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[交流]
【求助/交流】如何降低,多克隆抗體非特異性? 已有7人參與
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制備了一種多抗,但是,在進行細胞內(nèi)免疫熒光實驗時,非特異性非常非常的強,幾乎與實驗組無法區(qū)分。 制備過程: 1,克隆目的基因至表達載體pMal-C4x。 2,表達純化目的蛋白。X-MBP(帶有MBP標簽的融合蛋白) 3,純化融合蛋白X-MBP,很純! 4,注射新西蘭大白兔。 5,收集血清。 PS: 注射大白兔之前,沒有切除標簽蛋白MBP(約42KDa). 在western blot試驗中, 該抗體的特異性非常好。 但是, 當用于細胞實驗室時, 非特異性出奇的高, 實驗組和對照組, 一模一樣, 幾乎看不出任何區(qū)別。 在網(wǎng)上查看看了一些方法, 仍然不是太明白。 如何才能有效地降低特異性。 請各位蟲友支招,萬分感謝~ |
金、磁珠與抗體的結合 |

木蟲 (著名寫手)

金蟲 (正式寫手)

木蟲 (著名寫手)
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1、用你純化的重組蛋白偶聯(lián)制作親和層析介質,然后進行親和純化。 2、設計多肽免疫。 3、非融合表達目的蛋白。 但不管怎樣免疫,用免疫原偶聯(lián)進行親和純化都是需要的。用抗血清效果肯定要差些。 |

至尊木蟲 (文壇精英)
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