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[求助] western blot時(shí)marker問(wèn)題求助

今天做了一次WB,發(fā)現(xiàn)marker沒(méi)有跑開(kāi)，應(yīng)該有九條帶，其中紅色的是72KD，72KD上面有三條，下面應(yīng)該有5條帶。
但是今天跑出來(lái)的條帶是紅色的明顯，但是，72KD以下只有2條，以上也只有隱約可見(jiàn)的2條。
電泳液是新鮮配置的，而且我們實(shí)驗(yàn)室不是第一次出現(xiàn)這個(gè)情況有，希望能有高手幫忙分析一下是哪里出現(xiàn)了問(wèn)題嗎？

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1樓 2011-07-08 15:05:59

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雖然沒(méi)有遇到樓主的這種問(wèn)題，但是我在做WB時(shí)遇到了各種各樣的其他問(wèn)題，比如重復(fù)性太差，一次一次實(shí)驗(yàn)不一樣，同一東西同樣條件轉(zhuǎn)膜，第一次出來(lái)?xiàng)l帶，后一次卻怎么也出不來(lái)？大家有遇到過(guò)嗎？

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Wholaughslast,wholaughsbest!!

9樓2011-07-09 20:18:44

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轉(zhuǎn)膜時(shí)間和電壓是多少，是什么方式轉(zhuǎn)膜呢？

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2樓2011-07-08 15:48:34

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引用回帖:

Originally posted by a83875785 at 2011-07-08 15:48:34:
轉(zhuǎn)膜時(shí)間和電壓是多少，是什么方式轉(zhuǎn)膜呢？

不是，我不是轉(zhuǎn)膜出了問(wèn)題，是電泳那一步Marker跑不開(kāi)。本來(lái)應(yīng)該有九條帶的marker，今天做的時(shí)候只出來(lái)五條帶。不知道是為什么？轉(zhuǎn)膜是沒(méi)問(wèn)題的。

電泳的條件是70V，恒壓，120min，從濃縮膠到分離膠不變電壓，一直往下跑。一般來(lái)說(shuō)都是正常的，但是偶爾我們實(shí)驗(yàn)室也會(huì)出現(xiàn)像今天這樣的marker跑不開(kāi)的情況，不知道為什么？

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3樓2011-07-08 16:34:22

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我有時(shí)候marker也看不到，一般是轉(zhuǎn)膜轉(zhuǎn)過(guò)了。
否則就是market本身的問(wèn)題了。

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4樓2011-07-08 18:12:57

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