 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 3 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 790 | 回復(fù): 2 | ||
luge611新蟲 (初入文壇)
|
[求助]
PCR擴(kuò)到了基因上下游片段卻擴(kuò)不到全長，懇請高手指點(diǎn)幫助
|
|
PCR擴(kuò)增未知基因全長（從真菌cDNA中擴(kuò)） 已知該基因的保守區(qū)，且通過PCR擴(kuò)到（假定設(shè)計(jì)的引物為F1，R1）。根據(jù)已報(bào)道同源基因設(shè)計(jì)的全長引物（假定為F2，R2），PCR得不到全長。嘗試了改變模板濃度、引物濃度，溫度梯度、touchdown PCR，均沒有擴(kuò)出。 最后，嘗試分別用F2和R1，F(xiàn)1和R2為引物（即兩對引物交叉使用，PCR條件基本合適），擴(kuò)到了基因的上下游片段，且上下游片段有500bp左右的重疊區(qū)。把兩個(gè)片段拼接后與同源基因比對，匹配度達(dá)到86%，根據(jù)拼接后的序列又重新設(shè)計(jì)了一對全長引物（F3，R3），結(jié)果PCR還是擴(kuò)不到。嘗試了改變PCR的各種條件，還是不行。 已經(jīng)分析，模板、酶、buffer都應(yīng)該沒問題（因?yàn)橛猛瑯訔l件兩個(gè)片段都擴(kuò)得到），引物用oligo分析也可以，退火溫度從低到高都試了，也做了touchdown可就是擴(kuò)不到。把兩個(gè)片段作為模板做PCR卻擴(kuò)得到。有可能是剛好擴(kuò)到了兩個(gè)基因的片段嗎？可比對了同屬真菌的同類基因沒有同源性這么高的。 不知道問題出在哪里，還請高手們給分析分析，支個(gè)招��！ |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之重金屬檢測：精準(zhǔn)篩查，守護(hù)健康與環(huán)境的防線
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“蛙測重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤色/翻譯怎么收費(fèi)?
已經(jīng)有282人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標(biāo)南京
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
留學(xué)--博士招生
已經(jīng)有16人回復(fù)
-
化學(xué)工程，本211，求調(diào)劑，ab區(qū)不限
已經(jīng)有4人回復(fù)
-
邵陽學(xué)院食品與化學(xué)工程學(xué)院碩士調(diào)劑
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
湖北師范大學(xué)招調(diào)劑啦
已經(jīng)有3人回復(fù)
» 本主題相關(guān)價(jià)值貼推薦，對您同樣有幫助:
- 大片段PCR擴(kuò)增求助
已經(jīng)有34人回復(fù)
- 請教各位高人，基因克隆表達(dá)的流程是什么？
已經(jīng)有8人回復(fù)
- PCR產(chǎn)物測序結(jié)果
已經(jīng)有8人回復(fù)
- 高GC含量基因片段PCR問題
已經(jīng)有13人回復(fù)
- 求高手指點(diǎn)：RT-PCR的引物設(shè)計(jì)
已經(jīng)有18人回復(fù)
- 急救啊！各位大蝦，PCR擴(kuò)基因有雜帶(有圖)！
已經(jīng)有11人回復(fù)
- 基因組中長片段PCR應(yīng)該注意的幾個(gè)問題
已經(jīng)有14人回復(fù)
- PCR擴(kuò)不出目的基因
已經(jīng)有14人回復(fù)
- PCR總是無法正確擴(kuò)增所需片段，問題在哪？
已經(jīng)有6人回復(fù)
- 【求助/交流】菌落PCR擴(kuò)出來的片段不是目的片段，咋辦啊？？？？
已經(jīng)有9人回復(fù)
- 【求助/交流】為什么PCR擴(kuò)增產(chǎn)物片段長度比設(shè)計(jì)時(shí)的要長很多？
已經(jīng)有10人回復(fù)
- 【求助/交流】從RNA中擴(kuò)出含內(nèi)含子的全基因片段
已經(jīng)有12人回復(fù)
jinkui960
至尊木蟲 (知名作家)
- MolEPI: 22
- 應(yīng)助: 1220 (講師)
- 金幣: 10246.5
- 散金: 1000
- 紅花: 42
- 沙發(fā): 1
- 帖子: 5797
- 在線: 517.3小時(shí)
- 蟲號: 1327313
- 注冊: 2011-06-20
- 性別: GG
- 專業(yè): 生物防治
luge6112樓2011-08-01 16:50:12
luge611
新蟲 (初入文壇)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 93
- 帖子: 10
- 在線: 27.2小時(shí)
- 蟲號: 1312430
- 注冊: 2011-06-01
- 專業(yè): 環(huán)境微生物學(xué)
3樓2011-08-02 09:12:12
相關(guān)版塊跳轉(zhuǎn)
我要訂閱樓主 luge611 的主題更新
| 3 | 1/1 | 返回列表 |
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 288資源與環(huán)境專碩求調(diào)劑，不限專業(yè)，有學(xué)上就行 +6 | lllllos 2026-03-30 | 6/300 |
|
|---|---|---|---|---|
|
|
[考研] 一志愿：西北大學(xué)，英一數(shù)一408-284分求調(diào)劑 +5 | 12.27 2026-03-27 | 5/250 |
|
|
[考研] 309求調(diào)劑 +15 | 誰不是少年 2026-03-29 | 15/750 |
|
|
|
[考研] 085600 295分求調(diào)劑 +5 | W55j 2026-03-30 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 334分 一志愿武理 材料求調(diào)劑 +16 | 李李不服輸 2026-03-26 | 16/800 |
|
|
|
[考研] 考研調(diào)劑 +5 | Sanmu-124 2026-03-26 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 南京大學(xué)化學(xué)調(diào)劑 +10 | 景隨風(fēng) 2026-03-29 | 15/750 |
|
|
|
[考研] 調(diào)劑310 +12 | 溫柔的晚安 2026-03-25 | 13/650 |
|
|
|
[考研] 086000生物與醫(yī)藥調(diào)劑 +5 | Feisty。 2026-03-28 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 一志愿太原理工安全工程300分，求調(diào)劑 +5 | 0857求調(diào)劑. 2026-03-24 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 本科新能源科學(xué)與工程，一志愿華理能動285求調(diào)劑 +7 | AZMK 2026-03-28 | 11/550 |
|
|
|
[考研] 071000生物學(xué)求調(diào)劑，初試成績343 +7 | 小小甜面團(tuán) 2026-03-25 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 331環(huán)境科學(xué)與工程求調(diào)劑 +3 | 熠然好運(yùn)氣 2026-03-27 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 一志愿上海理工能源動力（085800）310分求調(diào)劑 +3 | zhangmingc 2026-03-27 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑 一志愿 本科 北科大 化學(xué) 343 +6 | 13831862839 2026-03-24 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 081200-11408-276學(xué)碩求調(diào)劑 +3 | 崔wj 2026-03-26 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 生物學(xué) 296 求調(diào)劑 +4 | 朵朵- 2026-03-26 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 打過很多競賽，085406控制工程300分，求調(diào)劑 +3 | askeladz 2026-03-26 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 材料專碩 335 分求調(diào)劑 +4 | 拒絕冷暴力 2026-03-25 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 一志愿北化315 求調(diào)劑 +3 | akrrain 2026-03-24 | 3/150 |
|