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qurande金蟲(chóng) (小有名氣)
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[求助]
求教關(guān)于用QIAquick PCR Purification Kit 是否能用來(lái)回收雙酶切過(guò)的pcr產(chǎn)物
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QIAquick PCR Purification Kit 是否能用來(lái)回收 雙酶切處理的pcr產(chǎn)物 及雙酶切處理過(guò)的空載體？ 說(shuō)明書(shū)相關(guān)的內(nèi)容如下 from sllution PCR YES restriction digestion YES tailing: DNA fragments YES Oligonucleotides no 因?yàn)閷?shí)驗(yàn)室的傳統(tǒng)是用這個(gè)盒子回收條帶單一的pcr產(chǎn)物，省的切膠回收 最近我的pcr產(chǎn)物比較小，切膠回收率太低，想試試這個(gè)，不知道pcr產(chǎn)物雙酶切處理及空載體雙酶切處理之后，能不能用這個(gè)盒子回收？不知道有人用過(guò)否，效率怎么樣 |
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imfly77
木蟲(chóng) (小有名氣)
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【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★ ★ ★
西瓜(金幣+5, MolEPI+1): Good！ 2011-08-10 18:20:48
西瓜(金幣+5, MolEPI+1): Good！ 2011-08-10 18:20:48
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膠回收的目的是為了徹底去除干擾的雜帶。比如在你的實(shí)驗(yàn)里，建議載體還是用膠回收的盒子，因?yàn)檩d體雙切后的小片段很可能不能被純化掉而干擾連接反應(yīng)（導(dǎo)致出現(xiàn)很多假陽(yáng)性）；純化后最后的載體目的片段終濃度到20 ng/ul，對(duì)于一般的克隆來(lái)說(shuō)也是夠了的。 PCR產(chǎn)物的話，一般來(lái)說(shuō)只要產(chǎn)物比較純，雙切后的碎片對(duì)實(shí)驗(yàn)影響不大，是可以直接用PCR產(chǎn)物純化試劑盒純化的。 |
3樓2011-08-10 15:05:24
summerjane
鐵蟲(chóng) (小有名氣)
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【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★ ★ ★
qurande(金幣+1): 恩，很專業(yè)，和我后來(lái)看到的說(shuō)明書(shū)上的一樣 2011-08-10 15:17:20
西瓜(金幣+3): Good 2011-08-10 18:18:37
西瓜(金幣+2, MolEPI+1): 因?yàn)樵噭┖械闹幽芙Y(jié)合大于100bp的片段 2011-08-10 18:22:09
qurande(金幣+1): 恩，很專業(yè)，和我后來(lái)看到的說(shuō)明書(shū)上的一樣 2011-08-10 15:17:20
西瓜(金幣+3): Good 2011-08-10 18:18:37
西瓜(金幣+2, MolEPI+1): 因?yàn)樵噭┖械闹幽芙Y(jié)合大于100bp的片段 2011-08-10 18:22:09
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如果酶切過(guò)的PCR產(chǎn)物的長(zhǎng)度大于100bp，你可以使用這個(gè)Kit純化PCR產(chǎn)物. 如果雙酶切處理之后兩個(gè)MCS之間的酶切片段長(zhǎng)度小于100bp，您也可以使用此Kit回收酶切處理之后的空載體 |
2樓2011-08-09 18:09:09
空谷幽風(fēng)
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4樓2011-08-10 15:10:54
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