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造血干細胞銅蟲 (初入文壇)
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[求助]
轉(zhuǎn)質(zhì)粒不成功,好幾次了,大家給分析一下問題會出在哪里
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| 目前在做質(zhì)粒構(gòu)建,問題是,載體酶切,片段酶切之后連接轉(zhuǎn)化涂板總是什么都不長,試過電轉(zhuǎn),DH4a轉(zhuǎn),都沒有成功,我之前沒怎么做過,實在不清楚問題出在哪里,求高手指教 |
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 【分子生物】EPI帖 |
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3樓2011-08-23 18:06:27
aayqaa
鐵蟲 (初入文壇)
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2樓2011-08-23 18:03:04
blackrose8089
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4樓2011-08-23 20:42:49
空谷幽風
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【答案】應(yīng)助回帖
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造血干細胞(金幣+1): 片段是pcr擴出來的,當時特異性都不錯,是雙酶切不錯,根據(jù)你說的我估計是酶切沒切好 2011-08-23 21:35:09
西瓜(金幣+5, MolEPI+1): Good！ 2011-08-23 23:34:18
造血干細胞(金幣+1): 片段是pcr擴出來的,當時特異性都不錯,是雙酶切不錯,根據(jù)你說的我估計是酶切沒切好 2011-08-23 21:35:09
西瓜(金幣+5, MolEPI+1): Good！ 2011-08-23 23:34:18
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先轉(zhuǎn)個完整的載體質(zhì)�？纯撮L不長，不長的話就是感受態(tài)或者操作的問題，如果長就要從酶切方面考慮，載體和片段是不是都完全酶切了： （1）載體如果是雙酶切，建議你先用兩種酶分別單切，看看是否都能切開 （2）片段如果是從質(zhì)粒上切下來的，那應(yīng)該問題不大；如果是酶切的PCR產(chǎn)物，請確認保護堿基的數(shù)量是否足夠，一般每個位點有5個保護堿基比較保險 |
5樓2011-08-23 21:05:32
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