 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 查看: 2591 | 回復(fù): 11 | |||
| 本帖產(chǎn)生 1 個(gè) BioEPI ，點(diǎn)擊這里進(jìn)行查看 | |||
addictedfish鐵蟲 (初入文壇)
|
[求助]
急救�。「魑淮笪r，PCR擴(kuò)基因有雜帶(有圖)！
|
||
|
大家好！我是實(shí)驗(yàn)菜鳥，從油菜基因組直接P基因。都快一個(gè)月了，天天作重復(fù)工作，該考慮都考慮了，但是就是擴(kuò)不出來東西。�，F(xiàn)就把PCR體系和反應(yīng)程序列出來。請各位大蝦們多多指教啊 ？ 體系：10 x buffer 2.5ul， dNTP (2.5mM each) 3ul, 25mM Mg+ 2ul , 上下引物各 1ul, 基因組DNA 3ul, 2.5U/ul Taq酶 0.4ul 加水至25ul 反應(yīng)程序： 94 3min 94 30s 52 1mim 72 2min 共 32個(gè)循環(huán)。 72 3min 這是我做的最好的一次，我要上面的帶，但是下面的非特異性帶更亮��？大家?guī)臀铱纯础?br /> 圖 |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
281求調(diào)劑（0805）
已經(jīng)有8人回復(fù)
-
環(huán)境領(lǐng)域全國重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室招收博士1-2名
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
材料專碩306英一數(shù)二
已經(jīng)有10人回復(fù)
-
301求調(diào)劑
已經(jīng)有6人回復(fù)
-
一志愿天津大學(xué)化學(xué)工藝專業(yè)（081702）315分求調(diào)劑
已經(jīng)有7人回復(fù)
-
302求調(diào)劑
已經(jīng)有6人回復(fù)
-
26博士申請
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
268求調(diào)劑
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
311求調(diào)劑
已經(jīng)有10人回復(fù)
-
被我言中：新模板不強(qiáng)調(diào)格式了，假專家開始管格式了
已經(jīng)有4人回復(fù)
» 本主題相關(guān)價(jià)值貼推薦，對您同樣有幫助:
- 反轉(zhuǎn)錄之后PCR擴(kuò)增片段問題的請教，急急急
已經(jīng)有5人回復(fù)
- 請問哪位大蝦投過Sensor Letters , 急救
已經(jīng)有8人回復(fù)
- 釀酒酵母基因組PCR出了16S的條帶
已經(jīng)有8人回復(fù)
- PCR擴(kuò)增不出條帶
已經(jīng)有9人回復(fù)
- PCR擴(kuò)不出目的基因
已經(jīng)有14人回復(fù)
- 求助 土壤基因組 PCR 擴(kuò)增問題
已經(jīng)有30人回復(fù)
- 為什么不同PCR儀擴(kuò)增結(jié)果不同
已經(jīng)有7人回復(fù)
- 瓊脂糖凝膠電泳檢測PCR產(chǎn)物出現(xiàn)雜帶
已經(jīng)有16人回復(fù)
- 【求助/交流】基因克隆時(shí)，酶切有結(jié)果，PCR卻P不出來
已經(jīng)有11人回復(fù)
- 【求助/交流】目的基因PCR后電泳出現(xiàn)多條帶
已經(jīng)有7人回復(fù)
- 【求助/交流】向各位大蝦請教“易錯(cuò)PCR”
已經(jīng)有4人回復(fù)
mascotte
金蟲 (正式寫手)
- BioEPI: 2
- 應(yīng)助: 10 (幼兒園)
- 金幣: 1998.9
- 紅花: 3
- 帖子: 328
- 在線: 193.4小時(shí)
- 蟲號(hào): 492008
- 注冊: 2008-01-07
- 專業(yè): 生物化學(xué)
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★
silicare(金幣+3, BioEPI+1): 可以考慮 2011-10-24 12:12:07
addictedfish(金幣+6): 謝謝您的回帖，是要做轉(zhuǎn)基因的。連克隆載體的。 2011-10-24 15:52:36
addictedfish(金幣+4): 2011-11-29 10:07:10
silicare(金幣+3, BioEPI+1): 可以考慮 2011-10-24 12:12:07
addictedfish(金幣+6): 謝謝您的回帖，是要做轉(zhuǎn)基因的。連克隆載體的。 2011-10-24 15:52:36
addictedfish(金幣+4): 2011-11-29 10:07:10
| 引物設(shè)計(jì)的有問題吧，把引物在ncbi上blast一下，看看有沒有其他的基因能被擴(kuò)增出來。一些基因有結(jié)構(gòu)相似的假基因（pseudogene），一些基因家族有保守型的結(jié)構(gòu)域，如果你的引物設(shè)計(jì)在這些位置就沒啥特異性了。如果PCR的目的是擴(kuò)增要構(gòu)建質(zhì)粒的基因，可以把位置符合條件的條帶切下來再PCR；如果是為了做半定量PCR就重新設(shè)計(jì)引物吧。 |
2樓2011-10-24 11:18:53
章信來
木蟲 (正式寫手)
- 應(yīng)助: 6 (幼兒園)
- 金幣: 3740.2
- 散金: 15
- 帖子: 439
- 在線: 90.4小時(shí)
- 蟲號(hào): 951095
- 注冊: 2010-02-01
- 專業(yè): 生殖生物學(xué)
3樓2011-10-25 07:26:06
惠子
銀蟲 (小有名氣)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 527.5
- 帖子: 191
- 在線: 13.6小時(shí)
- 蟲號(hào): 287550
- 注冊: 2006-10-21
- 專業(yè): 生化分析及生物傳感
4樓2011-10-25 12:32:23
xubo7
木蟲之王 (文壇精英)
小木蟲
- 應(yīng)助: 7 (幼兒園)
- 金幣: 302738
- 散金: 8606
- 紅花: 334
- 帖子: 22651
- 在線: 6759.6小時(shí)
- 蟲號(hào): 271434
- 注冊: 2006-08-12
- 性別: GG
- 專業(yè): 污染物行為過程及其環(huán)境效
5樓2011-10-26 08:34:21
yituyitu
木蟲 (正式寫手)
- 應(yīng)助: 17 (小學(xué)生)
- 金幣: 3923.1
- 散金: 53
- 紅花: 12
- 帖子: 797
- 在線: 121.2小時(shí)
- 蟲號(hào): 483519
- 注冊: 2007-12-26
- 專業(yè): 微生物資源與分類學(xué)
6樓2011-10-26 10:58:21
xiaoche
銅蟲 (小有名氣)
- 應(yīng)助: 2 (幼兒園)
- 金幣: 102.2
- 帖子: 69
- 在線: 8.5小時(shí)
- 蟲號(hào): 366525
- 注冊: 2007-05-09
- 性別: MM
- 專業(yè): 植物遺傳學(xué)
7樓2011-10-26 21:55:28
陳青chenqing
銅蟲 (初入文壇)
- 應(yīng)助: 2 (幼兒園)
- 金幣: 151.3
- 帖子: 26
- 在線: 28.7小時(shí)
- 蟲號(hào): 1127416
- 注冊: 2010-10-20
- 性別: GG
- 專業(yè): 微生物遺傳育種學(xué)
8樓2011-10-26 22:16:56
|
本帖內(nèi)容被屏蔽 |
9樓2011-11-13 20:12:25
cyz20050505
木蟲 (正式寫手)
- 應(yīng)助: 2 (幼兒園)
- 金幣: 43.1
- 散金: 2132
- 紅花: 8
- 帖子: 723
- 在線: 305.7小時(shí)
- 蟲號(hào): 974158
- 注冊: 2010-03-17
- 性別: GG
- 專業(yè): 水產(chǎn)生物遺傳育種學(xué)
10樓2011-11-17 10:36:00
相關(guān)版塊跳轉(zhuǎn)
我要訂閱樓主 addictedfish 的主題更新
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 296求調(diào)劑 +5 | 大口吃飯 身體健 2026-03-13 | 5/250 |
|
|---|---|---|---|---|
|
|
[考研] 293求調(diào)劑 +6 | 世界首富 2026-03-11 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 271求調(diào)劑 +12 | 生如夏花… 2026-03-11 | 14/700 |
|
|
|
[考研] 東南大學(xué)364求調(diào)劑 +5 | JasonYuiui 2026-03-15 | 5/250 |
|
|
[考研] 藥學(xué)383 求調(diào)劑 +3 | 藥學(xué)chy 2026-03-15 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 265求調(diào)劑 +4 | 威化餅07 2026-03-12 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 328求調(diào)劑 +3 | 5201314Lsy！ 2026-03-13 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 297求調(diào)劑 +4 | 學(xué)海漂泊 2026-03-13 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 學(xué)碩285求調(diào)劑 +13 | Wisjxn 2026-03-12 | 46/2300 |
|
|
|
[考研] 材料與化工（0856）304求B區(qū)調(diào)劑 +6 | 邱gl 2026-03-12 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 材料與化工求調(diào)劑一志愿 985 總分 295 +8 | dream…… 2026-03-12 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 材料工程調(diào)劑 +9 | 咪咪空空 2026-03-12 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 329求調(diào)劑 +3 | miaodesi 2026-03-12 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 【考研調(diào)劑求收留】 +3 | Ceciilia 2026-03-11 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 0703化學(xué)求調(diào)劑 +7 | 綠豆芹菜湯 2026-03-12 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑 +3 | 程雨杭 2026-03-12 | 3/150 |
|
|
|
[論文投稿]
投稿問題
 5+4
|
星光燦爛xt 2026-03-12 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 0856化學(xué)工程280分求調(diào)劑 +4 | shenzxsn 2026-03-11 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 0817化學(xué)工程與技術(shù)考研312分調(diào)劑 +3 | T123 tt 2026-03-12 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 321求調(diào)劑（食品/專碩） +3 | xc321 2026-03-12 | 6/300 |
|