 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 5 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 3152 | 回復(fù): 13 | ||
| 當(dāng)前只顯示滿足指定條件的回帖，點(diǎn)擊這里查看本話題的所有回帖 | ||
Ag6501金蟲 (正式寫手)
|
[求助]
枯草桿菌 電轉(zhuǎn)化 已有1人參與
|
|
|
最近做試驗(yàn)又出狀況了： 需要往枯草桿菌WB800N里轉(zhuǎn)一個質(zhì)粒，大概9000bp多，但現(xiàn)在我做每次都能轉(zhuǎn)進(jìn)去，就是轉(zhuǎn)化效率很低，但我需要很高的轉(zhuǎn)化效率，所以再次求助各位高人了： 枯草芽孢桿菌電轉(zhuǎn)方案（高滲透法）轉(zhuǎn)化 1）接種B . subtilis于3mlLB培養(yǎng)基中，過夜培養(yǎng).。 2）取2.5ml過夜培養(yǎng)物接入40ml（LB+0.5M 山梨醇）中，37℃，200rpm培養(yǎng)至OD600=0.85~0.95. 3）將菌液冰水浴10 min，然后5000g，5 min，4℃離心收集菌體。 4）用50ml預(yù)冷的電轉(zhuǎn)培養(yǎng)基（0.5M山梨醇，0.5M甘露醇，10%甘油），重新吹懸菌體，5000g，5min，4℃離心去上清，如此漂洗4次。 5）將洗滌后的菌體吹懸于1ml電轉(zhuǎn)培養(yǎng)基中，每EP管分裝60。 6）將60μl感受態(tài)細(xì)胞中加入50ngDNA（1~8μl），冰上孵育2min，加入預(yù)冷的電轉(zhuǎn)杯（1mm）中，電擊一次。 電轉(zhuǎn)儀設(shè)置：2.0kv,1mm,電擊1次。（電擊結(jié)果：時間常數(shù)=4.5~5.0ms,如果時間常數(shù)<4.2 ,則需要增加電轉(zhuǎn)培養(yǎng)基的漂洗次數(shù)或者提高感受態(tài)的稀釋倍數(shù)來獲得更高的轉(zhuǎn)化效率） 7）電擊完畢取出杯子并立即加入1ml RM（LB+0.5M山梨醇+0.38甘露醇），37℃，200rpm，復(fù)蘇3h后，涂板。37℃，過夜培養(yǎng)。 準(zhǔn)備 40ml（LB+0.5M山梨醇）：蛋白胨10g/l , 酵母粉5g/l , NaCl 10g/l , 3.6g山梨醇pH=7.2 200ml電轉(zhuǎn)培養(yǎng)基（0.5M山梨醇，0.5M甘露醇，10%葡萄糖）：18g 山梨醇，18.5g甘露醇，10%甘油。 10ml RM（0.5M山梨醇，0.38M甘露醇）：0.9g山梨醇，0.7g甘露醇。 2個50ml離心管，滅菌。 |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之重金屬檢測：精準(zhǔn)篩查，守護(hù)健康與環(huán)境的防線
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“蛙測重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤色/翻譯怎么收費(fèi)?
已經(jīng)有287人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標(biāo)南京
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
留學(xué)--博士招生
已經(jīng)有16人回復(fù)
-
化學(xué)工程，本211，求調(diào)劑，ab區(qū)不限
已經(jīng)有4人回復(fù)
-
邵陽學(xué)院食品與化學(xué)工程學(xué)院碩士調(diào)劑
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
湖北師范大學(xué)招調(diào)劑啦
已經(jīng)有3人回復(fù)
» 本主題相關(guān)價值貼推薦，對您同樣有幫助:
- 線性DNA，電轉(zhuǎn)化注意問題
已經(jīng)有4人回復(fù)
- 求側(cè)孢芽孢桿菌形態(tài)特征
已經(jīng)有3人回復(fù)
- 枯草芽孢桿菌轉(zhuǎn)化假陽性
已經(jīng)有8人回復(fù)
- 電擊轉(zhuǎn)化各種不長，求助啊~~~
已經(jīng)有6人回復(fù)
- 求助：質(zhì)粒為什么轉(zhuǎn)化感受態(tài)轉(zhuǎn)不進(jìn)去
已經(jīng)有11人回復(fù)
- 急求！GFP載體轉(zhuǎn)化野生型枯草芽孢桿菌以及紅霉素濃度
已經(jīng)有15人回復(fù)
- 關(guān)于枯草芽孢桿菌轉(zhuǎn)化的問題~
已經(jīng)有7人回復(fù)
- 制作超級電轉(zhuǎn)感受態(tài)注意事項(xiàng)
已經(jīng)有8人回復(fù)
- 枯草芽孢桿菌聚谷氨酸降解酶基因的原核表達(dá)及酶性質(zhì)分析
已經(jīng)有5人回復(fù)
- 芽孢菌滅活方法
已經(jīng)有9人回復(fù)
- 巨大芽孢桿菌地衣芽胞桿菌是不是厭氧型的
已經(jīng)有8人回復(fù)
- 枯草芽胞桿菌長成這樣是怎么了？干燥了嗎？附照片。
已經(jīng)有11人回復(fù)
- 急求釀酒酵母的電轉(zhuǎn)感受態(tài)制備方法和轉(zhuǎn)化方法
已經(jīng)有13人回復(fù)
- 【求助/交流】質(zhì)粒轉(zhuǎn)化枯草桿菌感受態(tài)原理
已經(jīng)有4人回復(fù)
- 【求助/交流】枯草芽孢桿菌電轉(zhuǎn)化
已經(jīng)有17人回復(fù)
- 【求助/交流】電轉(zhuǎn)杯問題
已經(jīng)有23人回復(fù)
- 【求助/交流】釀酒酵母質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌
已經(jīng)有11人回復(fù)
- 電轉(zhuǎn)化注意事項(xiàng)
已經(jīng)有14人回復(fù)
huangrui1988 
銅蟲 (小有名氣)
- 應(yīng)助: 73 (初中生)
- 金幣: 1727.8
- 散金: 20
- 紅花: 2
- 帖子: 201
- 在線: 210.1小時
- 蟲號: 953497
- 注冊: 2010-02-07
- 專業(yè): 微生物資源與分類學(xué)
5樓2014-02-14 21:21:45
2樓2014-01-10 17:28:28
3樓2014-02-11 13:33:39
Ag6501
金蟲 (正式寫手)
- 應(yīng)助: 3 (幼兒園)
- 金幣: 1719.7
- 散金: 28
- 紅花: 2
- 帖子: 314
- 在線: 203.1小時
- 蟲號: 629498
- 注冊: 2008-10-18
- 性別: MM
- 專業(yè): 環(huán)境微生物學(xué)
4樓2014-02-14 10:17:50
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 材料與化工調(diào)劑一志愿大連海事085600，349 +5 | 吃的不少 2026-03-30 | 5/250 |
|
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 哈爾濱工業(yè)大學(xué)材料與化工專碩378求調(diào)劑 +3 | 塔比烏斯 2026-03-30 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑，一志愿 南京航空航天大學(xué) ，080500材料科學(xué)與工程學(xué)碩，總分289分 +9 | @taotao 2026-03-29 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 08工科求調(diào)劑286 +4 | tgs_001 2026-03-28 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 279求調(diào)劑 +12 | j的立方 2026-03-29 | 12/600 |
|
|
|
[考研] 一志愿：西北大學(xué)，英一數(shù)一408-284分求調(diào)劑 +5 | 12.27 2026-03-27 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 26考研-291分-廈門大學(xué)（085601）-柔性電子學(xué)院材料工程專業(yè)求調(diào)劑 +5 | min3 2026-03-24 | 6/300 |
|
|
|
[有機(jī)交流] 考研調(diào)劑 +8 | watb 2026-03-26 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 0703化學(xué)求調(diào)劑 +6 | 丹青奶蓋 2026-03-26 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 348求調(diào)劑 +6 | 小懶蟲不懶了 2026-03-28 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 總分293求調(diào)劑 +8 | 加一一九 2026-03-25 | 11/550 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑 +6 | 蘆lty 2026-03-25 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 339求調(diào)劑，想調(diào)回江蘇 +6 | 烤麥芽 2026-03-27 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 286求調(diào)劑 +4 | 丟掉懶惰 2026-03-27 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 308求調(diào)劑 +7 | 墨墨漠 2026-03-25 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 08開頭275求調(diào)劑 +4 | 拉誰不重要 2026-03-26 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 085601 材料工程 313分 求調(diào)劑 +5 | Ong3 2026-03-27 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 材料求調(diào)劑 +5 | .m.. 2026-03-25 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 一志愿北化315 求調(diào)劑 +3 | akrrain 2026-03-24 | 3/150 |
|
|
|
[考研]
 材料考研調(diào)劑生
+3
|
黃粱一夢千年 2026-03-24 | 3/150 |
|