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小木蟲論壇-學術科研互動平臺 » 生物醫(yī)藥區(qū) » 分子生物 » 綜合其他 » 有關蛋白表達的問題
| 查看: 2486 | 回復: 25 | ||
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有關蛋白表達的問題
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| 我的目的基因片段只有200bp左右，現(xiàn)在連接到Pcdf-dute和pet-32a，每個都轉到BL-21和Rosste中，誘導過后，sds-page檢測，可是卻不表達，誘導條件試過37度、25度、20度、18度和16度，IPTG濃度0.8mm、1mm和1.2mm，培養(yǎng)基試過LB、TB還有一個高濃度培養(yǎng)基，都沒有表達，現(xiàn)在郁悶死了，無計可施了，各位大俠幫幫忙。 |
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2樓2011-11-20 21:16:06
blackrose8089
鐵桿木蟲 (職業(yè)作家)
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3樓2011-11-20 21:32:12
4樓2011-11-20 23:12:00
【答案】應助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
zibeisha(金幣+3): 2011-11-21 08:41:06
wanhscn(金幣+5): 熱心的認真的回答！ 2011-11-21 09:01:35
西瓜(金幣+2, MolEPI+1): Good！ 2011-11-22 18:09:41
zibeisha(金幣+3): 2011-11-21 08:41:06
wanhscn(金幣+5): 熱心的認真的回答！ 2011-11-21 09:01:35
西瓜(金幣+2, MolEPI+1): Good！ 2011-11-22 18:09:41
| 蛋白原核表達本來就是個難題 你在這就寥寥幾句 誰也幫不上忙 回話的都是只懂一二的 蛋白原核表達 單從表不表達上來說 主要要注意 蛋白的性質(zhì) 這個是最主要的 有的蛋白是疏水性極強的 有的蛋白是毒性的 有的蛋白等等 如果相關載體 菌株 都試過了 那只能放棄這個系統(tǒng)了 溫度 誘導濃度什么的 那只是針對表達質(zhì)量而言 你現(xiàn)在都沒表達出來 所以先確定到底有沒有表達 確定載體構建是否百分百正確 然后確定蛋白真的是沒表達 還是你沒檢測到 因為從KB數(shù)上看 你的蛋白很小 所以注意系統(tǒng) 可以用western檢測一下 如果有表達 只是量小 那么好 再繼續(xù)這個問題 |
5樓2011-11-21 02:42:51
6樓2011-11-21 08:38:28
xiaoshidemei
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7樓2011-11-21 09:58:37
gjs713
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8樓2011-11-21 10:22:11
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9樓2011-11-21 12:48:10
【答案】應助回帖
★
西瓜(金幣+1): 辛苦 2011-11-22 18:10:20
西瓜(金幣+1): 辛苦 2011-11-22 18:10:20
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好吧 得早說嘛 膜蛋白 膜蛋白表達 呵呵 看運氣了 不能說太多了 http://wolfson.huji.ac.il/wolfson.html 上這學習一下 實在不行就只能另換系統(tǒng)了 酵母的 體外的 等等 |
10樓2011-11-21 15:17:58
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