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[求助]
有關(guān)蛋白表達(dá)的問(wèn)題
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| 我的目的基因片段只有200bp左右，現(xiàn)在連接到Pcdf-dute和pet-32a，每個(gè)都轉(zhuǎn)到BL-21和Rosste中，誘導(dǎo)過(guò)后，sds-page檢測(cè)，可是卻不表達(dá)，誘導(dǎo)條件試過(guò)37度、25度、20度、18度和16度，IPTG濃度0.8mm、1mm和1.2mm，培養(yǎng)基試過(guò)LB、TB還有一個(gè)高濃度培養(yǎng)基，都沒(méi)有表達(dá)，現(xiàn)在郁悶死了，無(wú)計(jì)可施了，各位大俠幫幫忙。 |
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llglo
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4樓2011-11-20 23:12:00
2樓2011-11-20 21:16:06
blackrose8089
鐵桿木蟲(chóng) (職業(yè)作家)
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3樓2011-11-20 21:32:12
【答案】應(yīng)助回帖
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zibeisha(金幣+3): 2011-11-21 08:41:06
wanhscn(金幣+5): 熱心的認(rèn)真的回答！ 2011-11-21 09:01:35
西瓜(金幣+2, MolEPI+1): Good！ 2011-11-22 18:09:41
zibeisha(金幣+3): 2011-11-21 08:41:06
wanhscn(金幣+5): 熱心的認(rèn)真的回答！ 2011-11-21 09:01:35
西瓜(金幣+2, MolEPI+1): Good！ 2011-11-22 18:09:41
| 蛋白原核表達(dá)本來(lái)就是個(gè)難題 你在這就寥寥幾句 誰(shuí)也幫不上忙 回話的都是只懂一二的 蛋白原核表達(dá) 單從表不表達(dá)上來(lái)說(shuō) 主要要注意 蛋白的性質(zhì) 這個(gè)是最主要的 有的蛋白是疏水性極強(qiáng)的 有的蛋白是毒性的 有的蛋白等等 如果相關(guān)載體 菌株 都試過(guò)了 那只能放棄這個(gè)系統(tǒng)了 溫度 誘導(dǎo)濃度什么的 那只是針對(duì)表達(dá)質(zhì)量而言 你現(xiàn)在都沒(méi)表達(dá)出來(lái) 所以先確定到底有沒(méi)有表達(dá) 確定載體構(gòu)建是否百分百正確 然后確定蛋白真的是沒(méi)表達(dá) 還是你沒(méi)檢測(cè)到 因?yàn)閺腒B數(shù)上看 你的蛋白很小 所以注意系統(tǒng) 可以用western檢測(cè)一下 如果有表達(dá) 只是量小 那么好 再繼續(xù)這個(gè)問(wèn)題 |
5樓2011-11-21 02:42:51
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