youngsun50

版主

應(yīng)助: 3 (幼兒園)
金幣: 2640.6
帖子: 472
在線: 275.1小時
蟲號: 852073

[交流] 基因組文庫構(gòu)建時DNA酶切片段用膠回收嗎？

RT，我構(gòu)建的是細菌的基因組文庫，基因組DNA BamHI酶切后顯示大多在3K-7K,少數(shù)<3K,請問
1）我還用選擇性的膠回收某個范圍大小的片段嗎，因為我也不知道我要的基因在多大片段上？
2）如果不回收的話怎么處理酶切后產(chǎn)物進行連接反應(yīng)（用pUC19載體），我看有65度5min滅活限制酶的，可行嗎？
謝謝，請大俠指點

[ Last edited by youngsun50 on 2012-1-2 at 10:18 ]

回復此樓

» 猜你喜歡

不合理蛙科研實驗之“蛙測重金屬我背鍋三千” 已經(jīng)有0人回復
不合理蛙科研實驗之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI” 已經(jīng)有0人回復
化學工程及工業(yè)化學論文潤色/翻譯怎么收費? 已經(jīng)有140人回復
納米粒度分析已經(jīng)有3人回復
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標南京已經(jīng)有0人回復
留學--博士招生已經(jīng)有16人回復
化學工程，本211，求調(diào)劑，ab區(qū)不限已經(jīng)有4人回復
湖北師范大學招調(diào)劑啦已經(jīng)有6人回復
邵陽學院食品與化學工程學院碩士調(diào)劑已經(jīng)有0人回復

» 本主題相關(guān)價值貼推薦，對您同樣有幫助:

目的基因與載體雙酶切后過夜連接，轉(zhuǎn)化子在試管培養(yǎng)基中卻長不出來？已經(jīng)有17人回復
用什么凝膠回收試劑盒可以高效回收大片段DNA？已經(jīng)有6人回復
基因組DNA 酶切后條帶不清晰，什么原因��？已經(jīng)有15人回復
小片段DNA割膠回收求助已經(jīng)有11人回復
影響基因槍法轉(zhuǎn)化效率的因素已經(jīng)有8人回復
小片段DNA的回收問題已經(jīng)有19人回復
載體去磷酸化后的回收問題已經(jīng)有21人回復
有沒有會做啊？我想死的心都有了啊。。。DNA酶切模擬軟件�；蛉S結(jié)構(gòu)觀察等等已經(jīng)有3人回復
BAC文庫構(gòu)建中的問題已經(jīng)有6人回復
瓊脂糖切膠回收基因組已經(jīng)有10人回復
切膠回收過程有可能對DNA造成損傷嗎？已經(jīng)有9人回復
如何在切膠回收的DNA片段兩端添加P32標記呢？已經(jīng)有5人回復
構(gòu)建基因文庫（sauA酶切后膠回收效率低該怎么辦已經(jīng)有14人回復
目的基因片段膠回收后酶切，然后再跑膠后發(fā)現(xiàn)條帶很弱，怎么改進（求助）已經(jīng)有8人回復
細菌基因組文庫構(gòu)建的相關(guān)問題已經(jīng)有23人回復
酶切過DNA片段放了一周還能連接嗎已經(jīng)有18人回復
膠回收產(chǎn)物連接后片段大小已經(jīng)有16人回復
BAC文庫連接轉(zhuǎn)化已經(jīng)有22人回復
HindIII酶切基因組DNA 已經(jīng)有4人回復
如何建設(shè)一個好的研究小組已經(jīng)有39人回復
關(guān)于怎樣建立基因文庫，并通過文庫建系統(tǒng)發(fā)育樹已經(jīng)有9人回復
求助：基因組文庫構(gòu)建時一般用什么Marker？已經(jīng)有12人回復
Sau3A I 不完全酶切已經(jīng)有10人回復

» 搶金幣啦！回帖就可以得到:

查看全部散金貼

1樓 2012-01-01 17:25:09

已閱回復此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

brightfuture01

版主

★ ★
小木蟲(金幣+0.5):給個紅包，謝謝回帖
youngsun50(金幣+1): 2012-01-02 21:08:08
西瓜(金幣+1): 老專家，常來啊~ 2012-01-03 08:33:49

文庫構(gòu)建時盡量用較大的片段，切膠回收沒商量。

贊一下(2人)

回復此樓

2樓2012-01-02 18:54:44

已閱回復此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

quiller2000

專家顧問

★ ★
小木蟲(金幣+0.5):給個紅包，謝謝回帖
youngsun50(金幣+1): 2012-01-02 21:08:20
西瓜(金幣+1): 歡迎常來~ 2012-01-03 08:32:48

你要先調(diào)查一下你的基因組中一般情況下基因的大小；一般都要用膠回收！

贊一下(2人)

回復此樓

3樓2012-01-02 20:10:23

已閱回復此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

youngsun50

實習版主

應(yīng)助: 3 (幼兒園)
金幣: 2640.6
帖子: 472
在線: 275.1小時
蟲號: 852073

引用回帖:

樓: Originally posted by brightfuture01 at 2012-01-02 18:54:44:
文庫構(gòu)建時盡量用較大的片段，切膠回收沒商量。

但我怕漏掉小片段啊，能用PCR回收試劑盒把所有的片段都回收做連接嗎，小片段對連接沒影響吧？
另，pUC載體最大能插入多大的片段啊？謝謝

贊一下

回復此樓

4樓2012-01-02 20:57:01

已閱回復此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

brightfuture01

兌換貴賓

★ ★
小木蟲(金幣+0.5):給個紅包，謝謝回帖
西瓜(金幣+1, 專家考核): Good！ 2012-01-03 08:33:15
youngsun50(金幣+2): 2012-01-11 17:08:58

引用回帖:

4樓: Originally posted by youngsun50 at 2012-01-02 20:57:01:
但我怕漏掉小片段啊，能用PCR回收試劑盒把所有的片段都回收做連接嗎，小片段對連接沒影響吧？
另，pUC載體最大能插入多大的片段�。恐x謝

<10kb, 你需要補充下文庫質(zhì)量評價方面的知識。

有一個概念你需要自己查一下：覆蓋度

贊一下(2人)

回復此樓

5樓2012-01-02 23:17:07

已閱回復此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

jjdd55

兌換貴賓

應(yīng)助: 1 (幼兒園)
金幣: 28.7
帖子: 18
在線: 67.9小時
蟲號: 1523267

★ ★ ★
小木蟲(金幣+0.5):給個紅包，謝謝回帖
西瓜(金幣+2): 鼓勵應(yīng)助！歡迎常來哦~ 2012-01-04 12:11:28

可以直接連接試試效果不好的話用PCR產(chǎn)物純化試劑盒直接純化就可以了（qiagen有一個 50次 1000 挺不錯）回收大于100bp的片段

贊一下(2人)

回復此樓

6樓2012-01-04 00:18:12

已閱回復此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

youngsun50

實習版主

應(yīng)助: 3 (幼兒園)
金幣: 2640.6
帖子: 472
在線: 275.1小時
蟲號: 852073

引用回帖:

樓: Originally posted by brightfuture01 at 2012-01-02 23:17:07:

<10kb, 你需要補充下文庫質(zhì)量評價方面的知識。

有一個概念你需要自己查一下：覆蓋度

謝謝！再請教幾個問題：
1)酶切時是不完全酶切嗎，我用的六堿基酶切過夜，結(jié)果小于2K的也有，并不集中在3k-8k間，我這樣是不是不行啊?
2)一般構(gòu)建文庫需要DNA片段多少啊，0.1pmol夠嗎
3)轉(zhuǎn)化一般要涂多少個板子啊才能篩到自己想要的
我第一次做，實驗室也沒做過的，問題有點多希望不要煩，最好能說一下各個步驟的注意心得啥的，謝謝高手了！！

贊一下

回復此樓

7樓2012-01-11 17:16:52

已閱回復此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

brightfuture01

主管區(qū)長

★ ★
小木蟲(金幣+0.5):給個紅包，謝謝回帖
小丹木木(金幣+1): 回答的很藝術(shù)，也很簡單明了哦 2012-01-12 08:34:18
youngsun50(金幣+1): 2012-02-16 22:06:14

引用回帖:

7樓: Originally posted by youngsun50 at 2012-01-11 17:16:52:
謝謝！再請教幾個問題：
1)酶切時是不完全酶切嗎，我用的六堿基酶切過夜，結(jié)果小于2K的也有，并不集中在3k-8k間，我這樣是不是不行啊?
2)一般構(gòu)建文庫需要DNA片段多少啊，0.1pmol夠嗎
3)轉(zhuǎn)化一般要涂多少個板 ...

1)酶切時是不完全酶切嗎，我用的六堿基酶切過夜，結(jié)果小于2K的也有，并不集中在3k-8k間，我這樣是不是不行啊?
不完全酶切。

2)一般構(gòu)建文庫需要DNA片段多少啊，0.1pmol夠嗎
不夠。

3)轉(zhuǎn)化一般要涂多少個板子啊才能篩到自己想要的
運氣有的時候很重要。

我第一次做，實驗室也沒做過的，問題有點多希望不要煩，最好能說一下各個步驟的注意心得啥的，謝謝高手了！！

贊一下(2人)

回復此樓

8樓2012-01-11 17:25:15

已閱回復此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

最具人氣熱帖推薦 [查看全部]	作者	回/看	最后發(fā)表

[考研] 301求調(diào)劑 +5	A_JiXing 2026-04-01	5/250	2026-04-01 12:06 by -迷了路啊路
[考研] 292求調(diào)劑 +9	木蟲er12138 2026-04-01	9/450	2026-04-01 12:06 by liumengping
[考研] 070300一志愿211，312分求調(diào)劑院校 +13	小黃鴨寶 2026-03-30	13/650	2026-04-01 10:59 by oooqiao
[考研] 318一志愿吉林大學生物與醫(yī)藥求調(diào)劑 +6	篤行致遠. 2026-03-28	6/300	2026-04-01 09:28 by oooqiao
[考研] 考研調(diào)劑 +9	小蠟新筆 2026-03-29	10/500	2026-03-31 19:52 by Dyhoer
[考研] 一志愿華東師范大學有機化學專業(yè)，初試351分，復試被刷求調(diào)劑! +9	真名有冰 2026-03-29	10/500	2026-03-31 18:01 by xhai2011
[考研] 290分調(diào)劑求助 +10	吉祥止止陳 2026-03-25	10/500	2026-03-31 17:54 by 544594351
[考研] 08開頭看過來！��！ +3	wwwwffffff 2026-03-31	5/250	2026-03-31 17:45 by 星光/
[考研] 080500-315分復試調(diào)劑 +9	上岸3821 2026-03-31	9/450	2026-03-31 17:29 by 唐沐兒
[考研] 求化學調(diào)劑 +12	wulanna 2026-03-28	12/600	2026-03-31 16:38 by 690616278
[考研] 085404 22408 315分 +5	zhuangyan123 2026-03-31	6/300	2026-03-31 13:48 by limeifeng
[考研] 調(diào)劑求院校招收 +7	鶴鯨鴿 2026-03-28	7/350	2026-03-31 11:21 by oooqiao
[考研] 求調(diào)劑 +4	圖鑒212 2026-03-30	4/200	2026-03-31 10:20 by cal0306
[考研] 285求調(diào)劑 +6	AZMK 2026-03-29	9/450	2026-03-30 21:02 by dophin1985
[考研] 材料化工340求調(diào)劑 +3	jhx777 2026-03-30	3/150	2026-03-30 17:54 by JourneyLucky
[考研] 311求調(diào)劑 +10	lin0039 2026-03-26	10/500	2026-03-30 10:26 by herarysara
[考研] 295求調(diào)劑 +5	wei-5 2026-03-26	5/250	2026-03-30 08:34 by 探123
[考研] 298求調(diào)劑 +4	種圣賜 2026-03-28	4/200	2026-03-29 08:42 by q1092522407
[考研] 265求調(diào)劑11408 +3	劉小鹿lu 2026-03-27	3/150	2026-03-27 20:53 by nihaoar
[考研] 一志愿吉大071010，316分求調(diào)劑 +3	xgbiknn 2026-03-27	3/150	2026-03-27 10:36 by guoweigw