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youngsun50

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[交流] 基因組文庫(kù)構(gòu)建時(shí)DNA酶切片段用膠回收嗎？

RT，我構(gòu)建的是細(xì)菌的基因組文庫(kù)，基因組DNA BamHI酶切后顯示大多在3K-7K,少數(shù)<3K,請(qǐng)問(wèn)
1）我還用選擇性的膠回收某個(gè)范圍大小的片段嗎，因?yàn)槲乙膊恢牢乙幕蛟诙啻笃紊希?br /> 2）如果不回收的話怎么處理酶切后產(chǎn)物進(jìn)行連接反應(yīng)（用pUC19載體），我看有65度5min滅活限制酶的，可行嗎？
謝謝，請(qǐng)大俠指點(diǎn)

[ Last edited by youngsun50 on 2012-1-2 at 10:18 ]

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1樓 2012-01-01 17:25:09

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quiller2000

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你要先調(diào)查一下你的基因組中一般情況下基因的大��；一般都要用膠回收！

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3樓2012-01-02 20:10:23

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brightfuture01

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西瓜(金幣+1): 老專家，常來(lái)啊~ 2012-01-03 08:33:49

文庫(kù)構(gòu)建時(shí)盡量用較大的片段，切膠回收沒(méi)商量。

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2樓2012-01-02 18:54:44

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youngsun50

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樓: Originally posted by brightfuture01 at 2012-01-02 18:54:44:
文庫(kù)構(gòu)建時(shí)盡量用較大的片段，切膠回收沒(méi)商量。

但我怕漏掉小片段啊，能用PCR回收試劑盒把所有的片段都回收做連接嗎，小片段對(duì)連接沒(méi)影響吧？
另，pUC載體最大能插入多大的片段啊？謝謝

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4樓2012-01-02 20:57:01

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引用回帖:

4樓: Originally posted by youngsun50 at 2012-01-02 20:57:01:
但我怕漏掉小片段啊，能用PCR回收試劑盒把所有的片段都回收做連接嗎，小片段對(duì)連接沒(méi)影響吧？
另，pUC載體最大能插入多大的片段啊？謝謝

<10kb, 你需要補(bǔ)充下文庫(kù)質(zhì)量評(píng)價(jià)方面的知識(shí)。

有一個(gè)概念你需要自己查一下：覆蓋度

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5樓2012-01-02 23:17:07

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