 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 5 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 3446 | 回復: 18 | ||
| 當前只顯示滿足指定條件的回帖，點擊這里查看本話題的所有回帖 | ||
thendlee金蟲 (正式寫手)
|
[求助]
虛心請教關于平—粘末端的連接問題
|
|
|
用sal I和sca I這兩個酶處理過目的片段和載體，純化回收后連接，轉(zhuǎn)化后板沒有菌落，不知道哪里出現(xiàn)了問題。 這兩個酶，處理后一個產(chǎn)生粘性末端，一個產(chǎn)生平末端，有人說這樣的按正常的連接體系條件就可以，但我一直沒有成功。 我在做的是構(gòu)建全長，最后的這個1800bp的片段怎么也加不進去。 關于目的片段：是PCR產(chǎn)物，純化處理過，測序正確。 關于載體：確定有這兩個酶切位點，并且唯一。 關于T4連接酶：分別用過TAKARA、NEB、以及Fermentas。 關于連接體系：調(diào)整過多次比例。 關于反應溫度：試過16度過夜、22度4小時等等。 關于抗性：這個還是不會弄錯的。 關于感受態(tài)：自己做的，商品化的都用過 [ Last edited by thendlee on 2012-3-12 at 19:34 ] |
回復此樓» 猜你喜歡
288資源與環(huán)境專碩求調(diào)劑，不限專業(yè)，有學上就行
已經(jīng)有6人回復
-
生物學學碩，一志愿湖南大學，初試成績338
已經(jīng)有8人回復
-
266分，求材料相關專業(yè)調(diào)劑
已經(jīng)有6人回復
-
304材料求調(diào)劑
已經(jīng)有5人回復
-
359求調(diào)劑
已經(jīng)有5人回復
-
085600 286分 材料求調(diào)劑
已經(jīng)有12人回復
-
各位老師好，我的一志愿為北京科技大學085601材料專碩
已經(jīng)有10人回復
-
一志愿：西北大學，英一數(shù)一408-284分求調(diào)劑
已經(jīng)有5人回復
-
291求調(diào)劑
已經(jīng)有10人回復
-
一志愿鄭州大學，080500學碩，總分317分求調(diào)劑
已經(jīng)有11人回復
» 本主題相關價值貼推薦，對您同樣有幫助:
- 虛心請教，認真回答！關于包覆和摻雜的問題
已經(jīng)有11人回復
- 平末端加A尾連接T載體的問題
已經(jīng)有14人回復
- PCR產(chǎn)物平末端化問題
已經(jīng)有5人回復
- DNA片段連接到載體上都有什么方法
已經(jīng)有6人回復
- DNA片段化問題
已經(jīng)有9人回復
- 平末端連接不上，求助
已經(jīng)有21人回復
- 關于平末端連接
已經(jīng)有14人回復
- puc18 載體的疑問
已經(jīng)有4人回復
- 一個平末端和粘性末端怎樣連接比較好
已經(jīng)有8人回復
- 平末端連接，連上了，很多轉(zhuǎn)化子中沒有一個正確的，怎么辦？
已經(jīng)有13人回復
- 誰用過Fermentas的T4連接酶？
已經(jīng)有23人回復
- 平末端連接做不出來克隆
已經(jīng)有30人回復
- T4連接酶連接問題
已經(jīng)有7人回復
- 請教，關于通過PWSCF用wannier90計算介電極化和hopping integral的方法
已經(jīng)有8人回復
- 請教下實驗室怎么讓熒光粉較好的粘接在陶瓷片（玻璃板）上面
已經(jīng)有7人回復
- 誰做過pEASY-Blunt Cloning��？誰做過平末端連接��？
已經(jīng)有7人回復
- 【求助】關于1H-NMR聚合物末端H位移問題
已經(jīng)有6人回復
- 【求助】關于Gambit中幾何元素的連接問題
已經(jīng)有4人回復
- 【求助】請教導體和電介質(zhì)帶電的基礎概念問題
已經(jīng)有3人回復
- 【求助/交流】DNA片段連接的溫度和反應條件
已經(jīng)有7人回復
- 【求助/交流】關于去磷酸化
已經(jīng)有7人回復
- 【求助/交流】粘性末端連接問題
已經(jīng)有12人回復
- 【求助】請教一個關于液體皂增稠的問題
已經(jīng)有9人回復
- 【求助/交流】關于T載體連接問題
已經(jīng)有22人回復
- 【求助/交流】平末端必須去磷酸化嗎
已經(jīng)有6人回復
- 【求助】請教比旋光度偏高的問題
已經(jīng)有8人回復
wanglei512
金蟲 (正式寫手)
- BioEPI: 2
- 應助: 43 (小學生)
- 金幣: 1062.8
- 散金: 803
- 紅花: 20
- 帖子: 416
- 在線: 216小時
- 蟲號: 807816
- 注冊: 2009-07-12
- 性別: GG
- 專業(yè): 畜牧學
7樓2012-03-14 17:43:51
2樓2012-03-12 19:55:54
thendlee
金蟲 (正式寫手)
- BioEPI: 1
- 應助: 1 (幼兒園)
- 金幣: 1567.1
- 散金: 3
- 紅花: 3
- 帖子: 894
- 在線: 72.5小時
- 蟲號: 684876
- 注冊: 2008-12-30
- 性別: GG
- 專業(yè): 疫苗學
3樓2012-03-13 10:38:31
4樓2012-03-13 13:58:52
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 266分，求材料相關專業(yè)調(diào)劑 +5 | 哇呼哼呼哼 2026-03-30 | 6/300 |
|
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 322求調(diào)劑：一志愿湖南大學 材料與化工（085600），已過六級。 +9 | XX小鄧 2026-03-29 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑 +7 | 研研，接電話 2026-03-24 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 本科211生物醫(yī)學工程085409求調(diào)劑339分 +3 | 里子木yy 2026-03-29 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 求化學調(diào)劑 +11 | wulanna 2026-03-28 | 11/550 |
|
|
|
[考研] 332求調(diào)劑 +6 | Lyy930824@ 2026-03-29 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 311求調(diào)劑 +10 | lin0039 2026-03-26 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 337求調(diào)劑 +6 | 《樹》 2026-03-29 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 343求調(diào)劑085601 +3 | 要努力學習x 2026-03-29 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 289求調(diào)劑 +5 | BrightLL 2026-03-29 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 22408 359分調(diào)劑 +4 | Qshers 2026-03-27 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 291求調(diào)劑 +5 | Y-cap 2026-03-29 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 279求調(diào)劑 +4 | 蝶舞輕繞 2026-03-29 | 4/200 |
|
|
|
[碩博家園] 招收生物學/細胞生物學調(diào)劑 +4 | IceGuo 2026-03-26 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 266分，求材料冶金能源化工等調(diào)劑 +7 | 哇呼哼呼哼 2026-03-27 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 0856，材料與化工321分求調(diào)劑 +12 | 大饞小子 2026-03-27 | 13/650 |
|
|
|
[考研] 081200-314 +3 | LILIQQ 2026-03-27 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 286求調(diào)劑 +4 | 丟掉懶惰 2026-03-27 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 材料求調(diào)劑 一志愿哈工大總分298分，前三科223分 +5 | dongfang59 2026-03-27 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 080500求調(diào)劑 +3 | zzzzfan 2026-03-24 | 3/150 |
|