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xue_283金蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
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[求助]
小麥籽粒蛋白質(zhì)提取與SDS-PAGE
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小弟剛剛接觸蛋白質(zhì)測(cè)定與電泳,有些問(wèn)題請(qǐng)教各位,請(qǐng)大家不吝賜教啊。 問(wèn)題一、 蛋白質(zhì)提取過(guò)程,提取gliadin和glutenin,方法同Wieser and Seilmeier(1998)中的方法。提取后測(cè)定gliadin和glutenin的濃度,計(jì)算后發(fā)現(xiàn)濃度分別只有大概3mg/g flour和12mg/g flour左右,可我從文獻(xiàn)中發(fā)現(xiàn)別人測(cè)定的小麥籽粒蛋白質(zhì)gliadin和glutenin的濃度大概分別是20mg/g flour和40mg/g flour左右,我的計(jì)算過(guò)程經(jīng)過(guò)反復(fù)核對(duì),應(yīng)該沒(méi)有問(wèn)題,請(qǐng)問(wèn)誰(shuí)知道我測(cè)定的這個(gè)濃度范圍靠譜么? 問(wèn)題二、 SDS-PAGE 我在做電泳的時(shí)候,由于每個(gè)樣品的蛋白質(zhì)濃度不同,但是我卻將每個(gè)樣品的上樣體積保持了一致,跑出來(lái)的膠雖然比較清晰,但是由于不同樣品之間濃度不同導(dǎo)致上樣量(蛋白質(zhì)的量)不同,因而不同樣品跑出的條帶顏色深淺略有不同,但不是很明顯。這樣的膠還可以在文章中使用么?注:我的試驗(yàn)?zāi)康钠鋵?shí)并不是定量的,本來(lái)是打算看一看不同分子量的蛋白組分所占比例的差異,因此好像不同上樣量并不影響。但是我看別人發(fā)的文章中,上樣量都是保持一致的,因此比較糾結(jié),請(qǐng)各位高手指點(diǎn)。 謝謝。 |
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