 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
小木蟲論壇-學術科研互動平臺 » 生物醫(yī)藥區(qū) » 分子生物 » 綜合其他 » 大片段連接問題
| 5 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 3352 | 回復: 20 | |||
| 當前只顯示滿足指定條件的回帖，點擊這里查看本話題的所有回帖 | |||
xiazhiwuxie銀蟲 (小有名氣)
|
[求助]
大片段連接問題
|
||
|
實驗室得到一個片段為2300bp左右的DNA序列，但是連接了半個月都沒有連上，連接體系是：19T 0.5ul 目的條帶 5ul solution I 5ul 過夜4度，16度連接3h 也做過16度連接兩夜 做過4度 期間確定目的條帶回收正確，連接體系也用了最新的，感受態(tài)是買的，在這個條帶的靠近3‘端約200bp是已知的，根據(jù)這個片段設計引物，擴增約為140bp。 得到的結(jié)果：1.不長菌 2.長菌，但是擴增無條帶 3.長菌，擴增出140bp,但是測序后，結(jié)果告知插入片段只有200bp,且這200bp片段就是已知部分，抽了質(zhì)粒后得知條帶大約就是比2000bp的大點。 我快瘋了，折騰了半個月，序列還沒得到，求高人指導！ |
回復此樓» 收錄本帖的淘帖專輯推薦
 分子生化實驗經(jīng)驗積累 |
» 猜你喜歡
蛋白質(zhì)檢測：精準分析，解鎖生物分子的密碼
已經(jīng)有0人回復
-
不合理蛙科研實驗之小鼠實驗：嚴謹設計，解析生命機制的重要載體
已經(jīng)有0人回復
-
化學工程及工業(yè)化學論文潤色/翻譯怎么收費?
已經(jīng)有93人回復
-
不合理蛙科研實驗之重金屬檢測：精準篩查，守護健康與環(huán)境的防線
已經(jīng)有0人回復
-
不合理蛙科研實驗之“蛙測重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復
-
不合理蛙科研實驗之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標南京
已經(jīng)有0人回復
-
留學--博士招生
已經(jīng)有6人回復
-
化學工程，本211，求調(diào)劑，ab區(qū)不限
已經(jīng)有3人回復
» 本主題相關價值貼推薦，對您同樣有幫助:
- 構建pBI121表達載體，目的基因與載體連接不上
已經(jīng)有54人回復
- BAC文庫連接轉(zhuǎn)化
已經(jīng)有22人回復
- PCR ， 雙酶切，連接問題
已經(jīng)有17人回復
- 連接體系的確定
已經(jīng)有19人回復
- 載體連接
已經(jīng)有7人回復
- 為什么我做的酶切連接總是不長斑呢？
已經(jīng)有24人回復
- 【求助/交流】連接幾次，仍然不見菌落出現(xiàn)
已經(jīng)有15人回復
- 【求助/交流】pMD-18T載體連接出現(xiàn)了問題，請各位高手指點�。。�
已經(jīng)有17人回復
- 【求助/交流】超大片段連接問題
已經(jīng)有9人回復
- 【求助/交流】4kb片段的連接
已經(jīng)有14人回復
- 【求助/交流】大片段連接轉(zhuǎn)化成功與否問題
已經(jīng)有11人回復
- 【求助/交流】長片段的連接轉(zhuǎn)化
已經(jīng)有9人回復
- 【求助/交流】關于PCR克隆片段連接問題
已經(jīng)有4人回復
YZQ_XM
銅蟲 (初入文壇)
- 應助: 26 (小學生)
- 金幣: 123.2
- 帖子: 44
- 在線: 20.7小時
- 蟲號: 1757855
- 注冊: 2012-04-16
- 專業(yè): 遺傳學研究新技術與方法
10樓2012-04-16 10:51:02
dingfang0707
金蟲 (正式寫手)
- 應助: 5 (幼兒園)
- 金幣: 1570.1
- 散金: 499
- 紅花: 2
- 帖子: 507
- 在線: 208.3小時
- 蟲號: 1177271
- 注冊: 2010-12-25
- 性別: MM
- 專業(yè): 細胞增殖、生長與分化
2樓2012-04-14 20:20:10
ghs25372216
禁蟲 (正式寫手)
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感謝參與，應助指數(shù) +1
xiazhiwuxie: 金幣+5, ★有幫助, 我昨天想用T4連接酶連著，但是實驗室沒人做過，今天試試 2012-04-15 10:12:57
小丹木木: 金幣+3, 恩，可以試下 2012-04-16 13:54:47
感謝參與，應助指數(shù) +1
xiazhiwuxie: 金幣+5, ★有幫助, 我昨天想用T4連接酶連著，但是實驗室沒人做過，今天試試 2012-04-15 10:12:57
小丹木木: 金幣+3, 恩，可以試下 2012-04-16 13:54:47
|
本帖內(nèi)容被屏蔽 |
3樓2012-04-15 09:46:42
【答案】應助回帖
★ ★ ★ ★ ★
感謝參與，應助指數(shù) +1
xiazhiwuxie: 金幣+2, ★有幫助, PCR回收后條帶清晰 2012-04-16 12:12:16
小丹木木: 金幣+3, 鼓勵正解解答問題 2012-04-16 13:55:10
感謝參與，應助指數(shù) +1
xiazhiwuxie: 金幣+2, ★有幫助, PCR回收后條帶清晰 2012-04-16 12:12:16
小丹木木: 金幣+3, 鼓勵正解解答問題 2012-04-16 13:55:10
|
1.連接體系為10uL，目的DNA片段應為4.5uL,一般試劑盒都可用，連接溫度是不關鍵因素，時間過夜即可。 2.一定要保證PCR要達到一定濃度和純度才可以，這一點至關重要。 3.另外，樓主說的300bp引物是菌液PCR檢測引物嗎？最好用一個載體引物，一個片段上的引物，假陽性會降低，而且最好把全長擴出來。 4.若果菌液ＰＣＲ擴出來了就不用提質(zhì)粒了酶切了，可以直接測序。 |
4樓2012-04-15 12:16:44
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 329求調(diào)劑 +3 | 鈕恩雪 2026-03-25 | 3/150 |
|
|---|---|---|---|---|
|
|
[考研] 0854電子信息求調(diào)劑 +7 | α____ 2026-03-22 | 9/450 |
|
|
[考研] 總分293求調(diào)劑 +4 | 加一一九 2026-03-25 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 293求調(diào)劑 +7 | 加一一九 2026-03-24 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 085600材料與化工調(diào)劑 +9 | A-哆啦Z夢 2026-03-23 | 15/750 |
|
|
|
[考研] 生物技術與工程 +3 | 1294608413 2026-03-25 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 材料學求調(diào)劑 +6 | Stella_Yao 2026-03-20 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 070300化學求調(diào)劑 +9 | 苑豆豆 2026-03-20 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 材料與化工328分調(diào)劑 +4 | 。，。，。，。i 2026-03-23 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 335求調(diào)劑 +4 | yuyu宇 2026-03-23 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 一志愿武理材料工程348求調(diào)劑 +6 | ￣^￣゜汗 2026-03-19 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 298求調(diào)劑 +8 | 上岸6666@ 2026-03-20 | 8/400 |
|
|
|
[考研]
求調(diào)劑材料學碩080500，總分289分
 5+3
|
@taotao 2026-03-19 | 21/1050 |
|
|
|
[考研] 276求調(diào)劑 +3 | YNRYG 2026-03-21 | 4/200 |
|
|
|
[考研]
 一志愿070300浙大化學358分，求調(diào)劑！
+4
|
酥酥魚.. 2026-03-21 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 材料與化工（0856）304求B區(qū)調(diào)劑 +3 | 邱gl 2026-03-20 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 0703化學297求調(diào)劑 +3 | Daisy☆ 2026-03-20 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 一志愿南昌大學，327分，材料與化工085600 +9 | Ncdx123456 2026-03-19 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 295材料求調(diào)劑，一志愿武漢理工085601專碩 +5 | Charlieyq 2026-03-19 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 招收調(diào)劑碩士 +4 | lidianxing 2026-03-19 | 12/600 |
|