 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 2 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 813 | 回復(fù): 1 | ||||
| 本帖產(chǎn)生 1 個 MolEPI ，點擊這里進行查看 | ||||
zhoujiang09新蟲 (初入文壇)
|
[交流]
熒光定量PCR的實驗思路（求助） 已有1人參與
|
|||
| 各位師兄師姐，我想請教一下熒光定量PCR的實驗思路，我之前把RNA提了出來，并逆轉(zhuǎn)錄成cDNA了，并做了普通PCR。現(xiàn)在我要開始做熒光定量PCR了，可是我不怎么會，我做的是相對定量（2-deltadelta Ct 法），請師兄師姐們幫幫我。我聽有些人說先要拿模板（cDNA）上機摸索退火溫度，再拿ct值最小的那個作為標準品，適當?shù)谋稊?shù)稀釋成5個梯度，再做標準曲線，最后上樣品和標準曲線對照，是這樣嗎？ |
回復(fù)此樓» 收錄本帖的淘帖專輯推薦
 【分子生物】EPI帖 |
» 猜你喜歡
不合理蛙科研實驗之小鼠實驗：嚴謹設(shè)計，解析生命機制的重要載體
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實驗之重金屬檢測：精準篩查，守護健康與環(huán)境的防線
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
化學工程及工業(yè)化學論文潤色/翻譯怎么收費?
已經(jīng)有91人回復(fù)
-
不合理蛙科研實驗之“蛙測重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實驗之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標南京
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
留學--博士招生
已經(jīng)有16人回復(fù)
-
化學工程，本211，求調(diào)劑，ab區(qū)不限
已經(jīng)有4人回復(fù)
-
邵陽學院食品與化學工程學院碩士調(diào)劑
已經(jīng)有0人回復(fù)
» 本主題相關(guān)價值貼推薦，對您同樣有幫助:
- 熒光定量PCR
已經(jīng)有12人回復(fù)
- 熒光定量PCR的擴增曲線很奇怪，什么原因
已經(jīng)有7人回復(fù)
- 熒光定量PCR cDNA怎么定量��？
已經(jīng)有12人回復(fù)
- 熒光定量PCR實驗中的問題？
已經(jīng)有4人回復(fù)
- 相對定量PCR求助
已經(jīng)有16人回復(fù)
- 想請教下有關(guān)測序的問題！急�。。�
已經(jīng)有10人回復(fù)
- 熒光定量PCR與普通PCR產(chǎn)物不一樣？
已經(jīng)有6人回復(fù)
- 熒光定量PCR(相對定量)的分析結(jié)果2-△△Ct怎么看呀?
已經(jīng)有31人回復(fù)
- 【求助/交流】關(guān)于熒光定量PCR的一個問題
已經(jīng)有3人回復(fù)
- 【求助/交流】熒光定量pcr求助
已經(jīng)有11人回復(fù)
- 【分享】熒光定量PCR簡介
已經(jīng)有13人回復(fù)
- 【求助/交流】實時熒光定量pcr的問題
已經(jīng)有7人回復(fù)
- 【分享】熒光定量PCR實驗指南（二）
已經(jīng)有12人回復(fù)
- 【分享】熒光定量PCR實驗指南（一）
已經(jīng)有20人回復(fù)
- 【求助/交流】熒光定量pcr
已經(jīng)有11人回復(fù)
孫啟亮
金蟲 (著名寫手)
- MolEPI: 6
- 應(yīng)助: 121 (高中生)
- 貴賓: 0.216
- 金幣: 2881.3
- 散金: 2546
- 紅花: 23
- 沙發(fā): 19
- 帖子: 2792
- 在線: 677.4小時
- 蟲號: 1112263
- 注冊: 2010-10-01
- 性別: GG
- 專業(yè): 前寒武紀地質(zhì)學
★ ★ ★ ★
小木蟲: 金幣+0.5, 給個紅包，謝謝回帖
小丹木木: 金幣+3, MolEPI+1, 專家考核, 專業(yè)解答， 2012-04-16 13:39:00
小木蟲: 金幣+0.5, 給個紅包，謝謝回帖
小丹木木: 金幣+3, MolEPI+1, 專家考核, 專業(yè)解答， 2012-04-16 13:39:00
|
你首先得買熒光，不要買多，因為現(xiàn)在你還不知道哪個公司的熒光更適合你的目的基因。具體的結(jié)果還得等你做擴增效率的時候才知道。建議直接做熒光，不做普通的，這樣節(jié)省時間同時也不會比先做普通PCR節(jié)省多少錢。 其次，摸索實驗條件一般都是摸索退火溫度，你可以根據(jù)自己設(shè)計的引物大致確定你的退火溫度在什么范圍，然后做熒光，跑膠，根據(jù)擴增曲線與跑膠條帶灰度值等綜合指標選定一個合適的退火溫度。 再次，合適的Ct值范圍應(yīng)該是18-30，最好在23-24左右。但是有時候15以上，32以下也是可以接受的，這主要和你的目的基因有關(guān)。一般會出現(xiàn)的情況是Ct值太高，但如果你的目的基因拷貝數(shù)太低，那Ct值肯定高。 最后，關(guān)于擴增效率，擴增效率的制作不需要對照，你的目的就是做引物的擴增效率，看這個引物能不能被你所用。目的基因和內(nèi)參都得做，擴增效率直接影響到你的定量計算公式是否適用。只有在擴增效率在90%-105%的時候，才能用你說的那種方法。但有時候120%以下的擴增效率也可以接受。擴增效率的制作是通過倍比稀釋法，做六個梯度。 祝樓主實驗順利 |
2樓2012-04-16 08:33:01
相關(guān)版塊跳轉(zhuǎn)
我要訂閱樓主 zhoujiang09 的主題更新
| 2 | 1/1 | 返回列表 |
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 348求調(diào)劑 +3 | 小懶蟲不懶了 2026-03-28 | 3/150 |
|
|---|---|---|---|---|
|
|
[考研] 332求調(diào)劑 +4 | @MZB382400 2026-03-28 | 4/200 |
|
|
[考研] 生物學學碩，一志愿湖南大學，初試成績338 +6 | YYYYYNNNNN 2026-03-26 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 一志愿中南大學化學0703總分337求調(diào)劑 +5 | niko- 2026-03-27 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 329求調(diào)劑 +6 | 星野? 2026-03-26 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 材料277求調(diào)劑 +7 | min3 2026-03-24 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 086502化學工程342求調(diào)劑 +6 | 阿姨復(fù)古不過 2026-03-27 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 一志愿鄭大085600，310分求調(diào)劑 +5 | 李瀟可 2026-03-26 | 5/250 |
|
|
|
[碩博家園] 北京林業(yè)大學碩導招生廣告 +6 | kongweilin 2026-03-26 | 8/400 |
|
|
|
[考研]
材料學碩，求調(diào)劑
 6+5
|
糖葫蘆888ll 2026-03-22 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 329求調(diào)劑 +7 | 鈕恩雪 2026-03-25 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 343求調(diào)劑 +4 | 贈我一本書 2026-03-23 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 【雙一流院校新能源、環(huán)境材料，材料加工與模擬招收大量調(diào)劑】 +4 | Higraduate 2026-03-22 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 機械學碩310分，數(shù)一英一，一志愿211本科雙非找調(diào)劑信息 +3 | @357 2026-03-25 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 一志愿中南大學化學學碩0703總分337求調(diào)劑 +7 | niko- 2026-03-22 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 【2026考研調(diào)劑】制藥工程 284分 求相關(guān)專業(yè)調(diào)劑名額 +4 | 袁奐奐 2026-03-25 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 293求調(diào)劑 +7 | 加一一九 2026-03-24 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 289材料與化工（085600）B區(qū)求調(diào)劑 +4 | 這么名字咋樣 2026-03-22 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 344求調(diào)劑 +3 | desto 2026-03-24 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 材料/農(nóng)業(yè)專業(yè)，07/08開頭均可，過線就行 +3 | 呵唔哦豁 2026-03-23 | 4/200 |
|